197724. lajstromszámú szabadalom • Eljárás indolil- és indazolil-karboxamid származékok és a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására

197724

Miután a reakció reprodukálhatóságáról meggyőződtünk, az LTE4-et 40—45 perces mosással ismét eltávolítottuk, és négy preparátumot hatóanyagot tartalmazó, négy preparátumot pedig csak hordozóanyagot tartalmazó fürdőbe merítettünk. 10 perces inkubálás után a fürdőhöz 8xl0~9 mól LTE4-et, LTD4-et vagy LTC4«et adtunk, és feljegyeztük a preparátumok reakcióit. Mind a hatóanyagot tartalmazó, mind pedig a csak hor? dozóanyagot tartalmazó fürdőbe merített preparátumok esetén a

P a—P A

%-os gátlás ------------X 100

P-egyenlet segítségével kiszámítottuk a hatóanyag, illetve a hordozóanyag által előidézett %-os összehúzódás-gátlást (a képletben Pa a hatóanyag (illetve hordozóanyag) beadását megelőzően mért nyomásnövekedést, P* pedig a hatóanyag (illetve hordozóanyag) beadása után mért nyomásnövekedést jelenti mg egységekben). A kapott értékekből a kezelt, illetve a kontroli-csoportra kiszámítottuk az átlagos százalékos gátlás-értékeket, és az így kapott adatok közötti eltérés szignifikanciáját Student-féle t-próbával értékeltük. A hatóanyaggal kezelt szervpreparátumokat ezután 45 percig mostuk, majd ismét LTE4, LTD4 vagy LTC4 hatásának tettük ki. Azokat a szervpreparátumokat, ahol a leukotriénhez adott reakció visszaállt a hatóanyaggal végzett kezelés előtti értékre, további vizsgálatok céljára félretettük, míg ahol a reakció nem állt vissza az eredeti értékre, további vizsgálatokat nem végeztünk. Minden egyes kísérletet 5xl0-6 mól indometacin (ciklooxigenáz-inhibitor) jelenlétében végeztünk.

Az ismertetett kísérletben a vizsgált (I) általános képletű vegyületek mindegyike 10-5 mólos vagy annál lényegesen kisebb koncentrációban statisztikusan szignifikáns LTC4, LTD4 és/vagy LTE4-antagonista hatást mutatott.

Az (I) általános képletű vegyületek leukotrién-antagonista hatásának szelektivitását (egyéb, nem specifikus sima izom-depresszánsokkal összehasonlítva) úgy vizsgálhatjuk, hogy a fenti kísérletben görcskeltőként 1,5X XI 0~3 mól bárium-kloridot (aspecifikus görcskeltő anyag) használunk 5X10-6 mól indometacin jelenlétében.

Az (I) általános képletű vegyületek leukotrién-antagonista hatását in vivo körülmények között tengerimalacokon vizsgáltuk. A tengerimalacoknak beadtuk a vizsgálandó hatóanyagot, majd 15—60 perc elteltével az állatok torkába LTD4-et tartalmazó aeroszolt juttattunk. A kezelést 3 ml 30 pg/ml LTD4-et tartalmazó oldattal kezdtük. Az állatok légzését figyelemmel kísértük, és feljegyeztük azt az időt, amikor a leukotrién ál7

tál kiváltott légzési rendellenesség (például légszomj) beállt. Ugyanezt a kísérletet hatóanyaggal nem kezelt tengerimalacokon is elvégeztük, és a kezelt, valamint a kontroll csoportban a légzési rendellenesség beálltáig eltelt átlagos időtartamot összehasonlítottuk egymással. Ebben a kísérletben a vizsgált

(I) általános képletű vegyületek 100 mg/kgos orális vagy intravénás dózisban vagy inhalálással a szervezetbe juttatva jelentősen késleltették a légzési rendellenesség beálltát. Sok esetben a minimális hatásos dózis 100 mg/ /kg-nál lényegesen kisebb érték volt. A kísérletsorozatban a minimális hatásos dózis többszörösének beadásakor nem észleltünk semmiféle nem kívánt mellékhatást.

A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. Amennyiben a példákban mást nem közlünk,

— a műveletek szobahőmérsékleten (18— 25°C-on) végeztük;

— az oldószereket forgó bepárlókészüléken, 600—4000 Pa (4,5-30 Hgmm) nyomáson, 60°C-ot meg nem haladó fürdőhőmérsékleten pároltuk le;

— a gyorskromatografáláshoz Mere Kieselgel Art 9385 szilikagélt, az oszlopkromatográfiás műveletekhez Mere Kieselgel 60 Art 7734 szilikagélt (mindkét termék az E. Merck, Darmstadt, NSZK cég gyártmánya), a vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatokhoz 0,25 mm vastag Analtech GHLF Art 21521 szilikagél lemezeket (az Analtech, Newark, Delaware, USA cég gyártmánya) használtunk;

— a reakciók menetét rendszerint vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatokkal követtük, ezért a reakcióidőt csak tájékoztatás céljából közöljük;

— a megadott olvadáspont-értékek korrigálatlan adatok; egyes termékek polimorf módosulatok formájában képződnek, így eltérő olvadáspontú anyagokként különíthetők el;

— valamennyi kapott végtermék vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat alapján lényegében tiszta volt, és a termékek mikroelemzési adatai és NMR spektrum-adatai megfeleltek a várt szerkezeteknek;

— a közölt hozam-adatok csak tájékoztató jellegűek, és nem jelentik az elérhető maximumot;

— az NMR spektrumokat 80 MHz vagy 250 MHz frekvencián, CDC13, DMSO-d6 vagy CD3OD oldószerben vettük fel, és a kémiai eltolódás értékeket ő értékekben, tetrametil-szilán belső standardra vonatkoztatva, ppm egységekben adtuk meg.

1. példa

4- [l-(2-Karbamoil-etil)-5-( N-(ciklopentil-metil) -karbamoil) -indol-3-il-metil ] -3-metoxi-benzoesav-metil-észter előállítása

0,70 g 1 - (2-karbamoíl-eti 1) -5- (N- (ciklopentil-metil)-karbamoil)-indol és 0,19 g 4-8

5

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65