197567. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4-(2-pirimidinil)-1-piperazin heterociklusos karbonil származékok és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
197567 7 hozzá. A kicsapódott trietil-amin-hidrokloridot leszűrjük, a szűrletet bepároljuk, így 3,5 g olajszerű anyag alakjában megkapjuk a 2-etoxi-karbonil-1,1 -dimetil-etil-izocianátot. Etil-3- [4-(4-/2-pirimidinil/-piperazinil)-butil-amino-karbonil-amino]-3-metil-butanoát A fenti módon előállított 3,5 g izocianát-származékot 10 ml metilén-kloridban oldjuk, és az oldatot keverés közben, szobahőmérsékleten hozzáadjuk 10 ml metilén-kloridban oldott 4,15 g 4-(4-/2-pirimidinil/-l-piperazinil)-butil-aminhoz. 30 percig tartó keverés után a metilén-kloridot elpárologtatjuk, a maradékot 50 ml IN sósav-oldatban oldjuk, és az oldatot etil-acetáttal extraháljuk. A vizes, réteget telített kálium-karbonát oldattal meglúgosítjuk, majd éterrel extraháljuk. Az éteres extraktumot megszárítjuk és lepároljuk, így 5,4 g szirupszerű anyag alakjában megkapjuk a 3-[4-(4-/2-pirimidinil/-1-piperazinil) -butil-amino-karbonil-amino] -3-metil-butanoátot. 1 - [4-(4-'/2-pirimidiníl/-l - piperazinil)-butilJ-tetrahidro-6,6-dimetil-pirimidin-2,4-dion és 2- [4-(4-/2-pirimidinil/-t-piperazinil)-butil-imino] -tetrahidro-4,4-dimetil-6H-l ,3-oxazin-6-on 5,4 g etil-3- [4-(4-/2-pirimidinil/-l-piperazinil) -butil-amino-karbonil-amino] -3-metil-butanoátot 10 ml etanolban oldunk, hozzáadunk 1 g kálium-terc-butoxidot 5 ml etanolban oldva, és a reakcióelegyet keverés közben 30 percen át visszafolyási hőmérsékleten forraljuk. Ezután az etanolt elpárologtatjuk, a maradékot 50 ml vízzel kezeljük, és az így kapott olajat metilén-kloríddal extraháljuk. Az összegyűjtött és megszárított metilén-kloridos extraktumokat bepároljuk, így részlegesen kristályosodó, szirupszerű anyagot kapunk. Ezt a szirupot éterrel kezeljük, a kikristályosodott anyagot (2 g) leszűrjük, metanol és víz elegyében feloldjuk, aktív szénnel kezeljük, majd ismét leszűrjük és átkristályosítjuk. 1 g 2- [4- (4-/2 - pirimidiníl/-! -piperazinil) -butil-imino] - tetrahidro-4,4-dimetil-6H- 1,3-oxazin-6-ont kapunk, o.p.. 124—126°C. Az éteres oldat bepárlásával 2 g szirupot kapunk, ebből szilikagélen végzett kromatografátással olajszerű anyag alakjában megkapjuk az 1- [4- (4-/2-pirimidinil/-l-piperazinil) -butil] -tetrahidro-6,6-dimetil-pirimidin-2,4- -diont. Ezt az olajat oxálsav éteres oldatával kezelve megkapjuk a vegyület oxalátsóját; o.p.: 128—130°C. 3. Példa Szorongásgátló tulajdonságok in vitro meghatározása 5-HTf* kötés útján Az 5-HTia receptorhelyek radioligandumos kötési vizsgálatait a következőképpen végeztük: normotenzív hím Sprague-Dawley patkányok frontális cortexét kimetszettük, folyékony nitrogénben megfagyasztottuk, és felhasználásig —20°C-on tároltuk. A 4—8 patkányból kimetszett szöveteket összegyűjtöttük, és 70 térfogatrész Tris-sósav puffer 8 (50 mM, pH =7,7) hozzáadásával, a maximális sebesség 2/3-ára beállított Polytron készülékkel 20 másodperc alatt homogenizáltuk. A homogenizátumot 36500 g-vel 10 percig centrifugáltuk, a kapott pelletet azonos térfogatú puffer hozzáadásával újra homogenizáltuk, és ezt a folyamatot még kétszer megismételtük. A második és harmadik centrifugálás között a szövethomogenizátumot 37°C-on 10 percig inkubáltuk. A legvégül kapott pelletet azonos térfogatú Tris-pufferbén szuszpendáltuk, amely 10 m pargilint, 5,7 mM kalcium-kloridot és 0,1% aszkorbinsavat is tartalmazott. Ezt a szuszpenziót 10 percen át 37°C-on inkubáltuk, majd a kötés vizsgálatához történő felhasználásig hűtve tároltuk. 0,7 ml szövethomogenizátumot, 0,1 ml radioaktív ligandumot és 0,1 ml, megfelelő koncentrációjú vizsgálandó vegyületet pufferoldattal 1 ml végső térfogatra feltöltve 15 percen át 37°C-on inkubáltunk. Az inkubálást Whatman GF/B szűrőn történő gyors szűréssel fejeztük be, majd a szüredéket 3x x5 ml jéghideg Tris-sósav pufferrel (50 mM, pH = 7,0) átmostuk. A rádioaktivitás mérése előtx Aquasol-Z-vel (NEN) 45—50%-os hatékonyságú extrahálást végeztünk. Az 5-HTu receptorhelyek megjelölésére [3H] -8-hidroxi-2- (di-n-propil-amino) -tetralint ( [3H] -8-OH-DPAT) használtunk 1 mM koncentrációban. Lényegében a fenti eljárást követve vizs gáltuk meg az I-[4-(4-/2-pirimidínil/-1 -piperazinil ) -butil] -tetrahidro-6,6-dimetíl-pirimidin 2,4-diont („A" vegyület) és a 2-[4-(4- -/2 pirimidinil/-l -piperazinil) -butil-imino] - -tetrahidro-4,4-dimetil-6H-1,3-oxazin-6-ont(B vegyület). Az eredményeket a pIC50 értékkel adjuk meg, ez a vizsgált vegyület azon koncentrációjának tizes alapú logaritmusa, me'y a specifikus kötődést 50%-ban gátolja. Vizsgált vegyület 5-HTia kötési affinitás, patkány agyi cortex „A” vegyület 6,94 B vegyület 6,32 Buspirone 7,52 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás (I) általános képletü 4-(2-pirimidini!)-l -piperazin-heterociklusos karbonil-származékainak — ahol a képletben n jelentése 2 és 5 közötti egész szám X jelentése (a) vagy (b) képletü csoport, és gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy a) egy (II) általános képletü 3-(/N-alkil/-ureido)-vajsav-származékot — ahol n jelentése a tárgyi körben megadott, R jelentése 1—4 szénatomos alkilcsoport, Y jelentése pedig valamely lehasítható csoport — l-(2-pirimidinil)-piperazinnal reagáltatunk, az így kapott 3- [N- [co- (4-/2-pirimidinil/-I-piperazinil) 5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
