197515. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-acetil-neuraminsavat tartalmazó, köptető hatású gyógyszerkészítmények előállítására
5 197515 6 2. táblázat Acetil-kolin hatása a csillószőr-mozgásra. Hatóanyag g/ml Mozgás béka 1 /s/cm/ száma 2 3 Gyorsulás /%/ béka száma 1 2 X 3 Kontroll 45,0 37,0 39,3 0 0 0 Acetil-10-5 27,0 29,7 26,3 40,0 19,7 33,1-kolin 1 o_1+ 21,0 21,7 20,7 53,3 41,4 47,3 Gyorsulás /%/ = /1 hatóanyag kontroll-idő , iás-' x 100 2. példa N-Acetil-neuraminsav hatása a csillószőrös sejt rotációjára. (A vizsgálat tárgya.) Az emberi légutakból és béka szájpadlásból származó csillószőrös sejteket használtunk. A sejtcsoportoknak a csillószőrcsapások következtében fellépő rotációját vizsgáltuk N-acetil-neuraminsav alkalmazása előtt és után, hogy megerősítsük ezeknek a hatóanyagoknak a csillószőrös sejtekre való hatását. (Módszer) A humán csillószőrös sejteket bronchoszkóp segítségével gyűjtöttük normális légcsőből. A csillószőrös sejteket a bronchus vakarásával választottuk le, miközben a bronchoszkópon keresztül figyeltük a műveletet. A béka csillószőrös sejteket a palatális nyálkahártya kaparásával vettük, anélkül hogy különösebben óvatosak lettünk volna. Az így nyert csillószőrös sejteket a Gibco Company által gyártott Medium 199-ben szuszpendáltuk és a csillómozgás következtében rotáló mozgást végző néhány sejtből álló csillószőrös sejtcsoportokat mikrofecskendővel szívtuk fel oly módon, hogy elkerüljük a sejtek károsodását, majd fáziskontraszt-mikroszkópon át végeztük a megfigyelést. A sejtcsoportokat átvittük egy fedőlemezre, és egy csepp csirkeplazmát (Difco Company terméke) és egy csepp 50%-os csirkeembrió-extraktumot adtunk a sejtekhez, amelyek így csomókat képeztek. A csomókban a rotáló mozgást videofelvevővel felvettük, és megmértük a percenkénti rotációk számát. A hatóanyagokat a Medium 199-ben oldottuk fel, és egy Rose-kamrához csatlakozó csövön át injektáltuk be. Az injektálás után 5, 10 és 15 perccel videofelvevő segítségével felvettük a rotáló mozgást, és mértük a körforgások számát. (Eredmény). N-Acetil-neuraminsav (10~4 — 10'1 mg/ /ml) hozzáadására a csillószőrös sejtek rotáló mozgása fokozatosan gyorsul közvetlenül a hozzáadástól kezdve. A hozzáadás után 5 perccel, 10 perccel és 15 perccel megvizs-20 gáltuk a 10'3 — 10'2 mg/ml hatóanyagot kapott lemezeket. Ezeken a lemezeken a percenkénti forgások sebessége körülbelül 25%-kal nagyobb volt, mint a Medium 199-ben amint az 1. és 2. ábrákból látható. Azt is bizo- 25 nyitottuk, hogy a csillószőrös sejtek rotáló mozgása a dózistól bizonyos mértékben függően fokozódik 10*3 — 3 x 10'2 mg/ml terbutalin, azaz 5- [2- (terc-butil-amino) -1 -hidroxi-etil] - -1,3-dihidroxi-benzol hozzáadására. A hatás 30 különösen jól észlelhető volt a hozzáadás után 5 perccel, amint a 3. ábrából látható. Bizonyítottuk azt is, hogy a csillószőrös sejtek rotáló mozgásának sebessége 10*3 mg/ /ml és 3 x 10~3 mg/ml acetil-kolin hozzáadásá- 35 ra is gyorsult. A rotáló mozgás sebességcsúcsait körülbelül 10 perccel és 5 perccel a hozzáadás után észleltük, amikor a hozzáadott mennyiség 10'3 mg/ml, illetve 3xl0'2mg/ /ml volt. Mindkét esetben a rotáló mozgás 40 a hozzáadás után 13 perccel abbamaradt. (Értékelés). Megerősítettük, hogy terbutalin és acetil-kolin, amelyekről ismeretes, hogy hatásosak csillószőrök csapásainak gyorsításában, a csillószőrös sejtek rotáló mozgását is gyor- 45 sítják. N-Acetil-neuraminsavról is megállapítottuk, hogy hatásos csillószőrös sejtek rotáló mozgásának gyorsításában. Tekintve, hogy a csillószőrös sejtek rotáló mozgása a csilló- 50 szőr csapásnak adódik át, ezáltal elősegítik a köptetést. Ez világosan mutatja, hogy az N-acetil-neuraminsav köptetőként hatásos lesz. 3. példa 55 N-Acetil-neuraminsav hatása a köpetre. (A vizsgálat tárgya.) A mucociliaris transzport sebességét (a továbbiakban MTR), azaz a köpet csillók által való továbbításának sebességét mértük béka palatális nyálkahártya segítségével. 60 Ugyanekkor összehasonlítottuk a köpetnek az N-acetil-neuraminsav adagolása előtti is utáni fizikokémiai tulajdonságait. (Módszer.) A vizsgálati anyagként használt köpetet 65 krónikus elzáródásos tüdőbetegségben szen-4
