197358. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán tumorellenes anyag, valamint a fenti anyagot tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására
8 197358 9 oszlopéban található adatok szerint (lásd PMA nélkül/PMA jelenlétében oszlop). A PMA TPA néven is ismert. Az L(929) (ATCC) sejtvonalból származó, hTNF-fel szemben rezisztenssé tett tenyésztett egér L-M sejtek - melyeket 10® sejtre számolva 2-3 Mg HTNF-et tartalmazó táptalajba hetenként megismételt átoltással tenyésztettünk ki - teljes kereszt-rezisztenciát mutatnak az egér TNF-re. Ez a kereszt-rezisztencia nagyon figyelemreméltó. A hTNF in vivo vizsgálatát [BALB/Lcx xC57BL/6]Fi nőstény egéren végeztük. Az állatoknak intradermálisan 5xl05 Meth A szarkoma sejtet inkubáltunk, majd 7 nappal később az állatok egyetlen intravénás adagban hTNF-et kaptak. 24 óra elteltével a tumor vérzéses elhalását az alábbi értékelési rendszer segítségével értékeltük ki: (-) nincs hatás (+) enyhe hatás (++) közepes hatás (+++) erős hatás, a tumor felület 90%-ára kiterjedő hatás (Carswell és munkatársai fentebb idézett cikke). Az eredmények szerint a hTNF a standard TNF vizsgálatban in vitro és in vivo hasonló hatást mutat, noha általában a hTNF humán célsejtekkel szembeni specifikus aktivitása nagyobb, mint az egérből származó TNF-é. Az endotoxin meghatározását Limulus Amebocyte lizátummal ( M ic rob iolog ical Associates) végeztük. Mivel a klónozott egér histiocita sejtvonalak TNF-et termelnek, a normál és kóros humán histiociták vizsgálatát is célszerű el- W gezni, a fenti sejtek hTNF termelésének meghatározása céljából, emberben. Az 1. táblázatban a B-sejtekkel kapott eredményekből aira következtethetünk, hogy a normál B-sejteknek is van hTNF-termelő képessége. 5 10 15 20 25 6
