197357. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kicsapott heterológ fehérjék tisztítására és reaktiválására
55 197357 56 szolubilizálására eléggé erős denaturáló képességű denaturáló oldattal kezeljük, és a fehérjét szolubílizált alakjának megtartása mellett, adott esetben az említett erősen denaturáló oldat tisztítása után, az alábbi kezeléssel hozzuk biológiailag aktív alakba: a) az erősen denaturáló oldatot a benne oldott fehérje oldatban tartása mellett gyengén denaturáló oldattá alakítjuk, a szolubilizált fehérje diszulfid-döntéseit az erősen denaturáló oldat gyengén denaturáló oldattá alakítása előtt vagy ezt kővetően felhasitjuk, majd az említett diszulfid-kötéseket a fehérjét biológiailag aktív konformációjúvá alakítva helyreállítjuk; vagy b) az erősen denaturáló oldatot a fehérje oldatban tartása mellett egy másik, gyengén denaturáló oldatra cseréljük ki; vagy c) Az erősen denaturáló oldatot az említett fehérje oldatban tartása közben gyengén denaturálóvá alakítjuk, és a fehérjét oldva tartalmazó denaturáló oldatot egy vagy több tisztítási műveletnek vetjük alá; mimellett kívánt esetben a fenti a), b) vagy c) eljárás során a gyengén denaturáló oldatot a fehérje oldatban tartása közben egy még gyengébben denaturáló oldattá, majd kívánt esetben az utóbbit nem denaturáló oldattá alakítjuk tovább, és a biológiailag aktív heterológ fehérjét kinyerjük az oldatból. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a denaturáló oldatként redukálószert tartalmazó oldatot alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a diszulfid-kötéseket felhasító kezelést az erősen denaturáló oldatban végezzük. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a diszulfid-kötéseket felhasító kezelést a gyengén denaturáló oldattá való alakítás után végezzük. 5. Az 1., 3. vagy 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a diszulfid-kötéseket valamely szulfittal, enyhe oxidálószer jelenlétében való kezeléssel hasítjuk fel, a megfelelő fehérje-S-szulfonáttá való átalakítás útján. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy enyhe oxidálószerként nátrium-tetrationátot használunk. 7. Az 5. vagy 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a diszulfid-kötések helyreállítását valamely szulfhidril-vegyülettel, ennek a megfelelő diszulfid-származéka jelenlétében végezzük. 8. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fehérjének az 1. igénypont a) eljárása szerinti kezelését egy szulfhidril-vegyülettel végezzük, ennek a megfelelő diszulfid-származéka jelenlétében, annyi denaturáló oldatban, amennyi elegendő a fehérje oldhatóságának az egész denaturálási művelet alatti fenntartásához. 9. A 7. vagy 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szulfhidril-vegyületként redukált glutationt alkalmazunk. 10. A 7-9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a megfelelő diszulfidot oly módon állítjuk elő, hogy a szulfhidril-vegyületet levegőn oxidálni hagyjuk. 11. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fehérje kezelését oly módon végezzük, hogy a fehérjét a szolubilizáció, a denaturáló oldat átalakítása és az esetleges tisztítási műveletek során redukált állapotban tartjuk, majd a denaturálószer túlnyomó részének vagy egészének eltávolitása közben újraoxidáljuk. 12. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az újraoxidálást a redukélószer kizárása és a levegő oxidáló hatásának érvényesülni hagyása útján végezzük. 13. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy erősen denaturáló oldatként valamely ionos denaturálószer oldatát alkalmazzuk. 14. A 13. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy erős denaturálószerként valamely guanidinsót használunk. 15. A 13. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy erősen denaturáló oldatként valamely guanidinsó 4-9 móí/l-es oldatát használjuk. 16. Az előző idénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy gyengén denaturáló oldatként karbamid 1-9 mól/1- -es oldatát vagy valamely guanidinsó 0,5- -2 mól/l-es oldatát használjuk. 17. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy gyengén denaturáló oldatként valamely nem-ionos denaturálószer oldatát használjuk. 18. A 17. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy gyenge denaturálószerként karbamidot használunk. 19. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett gyengén denaturáló oldatot az eljárás során még gyengébben denaturáló oldattá alakítjuk. 20. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fehérjét egy gyengén denaturáló oldatból egy nem-denaturáló oldatba visszük át. 21. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett egyik fehérje-oldatnak egy másik fehérje-oldattá való átalakítását puffer-csere útján végezzük. 22. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fehérje erősen denaturáló oldatát tisztítási műveletnek vetjük alá, a gyengén denaturáló oldattá való átalakítás előtt. 23. A 22. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy tisztítási műveletként a fehérjét egy méret szerinti szelektáló raole-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 29
