197357. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kicsapott heterológ fehérjék tisztítására és reaktiválására
43 197357 44 sávjai láthatók. Ebben a két oszlopban az emberi növekedési hormon sávjának intenzitása jelentős mértékben csökkent. A 2. és 6. oszlop előletlen sejtek kis sebességű illetve nagy sebességű centrifugálásával kapott üledékek sévjait mutatja be. A 4. és 8. oszlop az elölt sejtek kis sebességű illetve nagy sebességű centrifugálásával nyert üledékek sévjait szemléltetik. Az elölt sejteknél nagyobb az emberi növekedési hormon sávjának intenzitása. A 6. ábrán látható, hogy a nátrium-dodecil-szulfáttal extrahált sejteknél az emberi növekedési hormon sávja természetesen azonos intenzitású. Az előletlen sejteknél igen jelentős volt az emberi növekedési hormonnak megfelelő sáv mind a felülúszó folyadékban, mind pedig az üledékekben, akár nagy, akár kis sebességű centrifugálással történt az elválasztás. Másrészt, az elölt sejteknél csökkent a felülúszó folyadékban lévő emberi növekedési hormon mennyisége mind a kis, mind a nagy sebességű centrifugálással végzett elválasztásnál, a szemcsében azonban növekedett az emberi növededési hormon mennyisége. A száj- és körömfájás vírus fehérjeburkolata Többlépéses eljárás Az A24 típusú száj- és körömfájás vírust kódoló gént tartalmazó Exherichia coli K-12 W3110/pFHB (A24) törzset (amelyet a 374 855 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés, a 68 693 sz. európai és a 2 103 622 számú angol szabadalmi leirés ir le, a bejelentés napja 1982. május 4.) addig tenyésztettük, amíg a sejtsűrűség 30-50 optikai sűrűség egységnek nem felelt meg 550 nm-cn; vagy amíg a nedves sejtpép mennyisége 40 g nem lett 1 liter M9 táptalajban vagy hasonló, sókat tartalmazó közegben, amelyben a triptofán mennyisége 40- 120 mg/1, a glukózé pedig legfeljebb 5 tómeg% volt. Lásd Experiments in Molecular Genetics, J.H. Miller, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1972)). 10 litei- tenyészetet 0,25% fenollal és 0,25% toluollal kezeltünk 0,5 órán át, majd centrifugáltuk. A sejtpépet megfagyasztva tároltuk a fehérje tisztítása előtt. Az alkalmazott tisztítást a 3. folyamatábrán mutatjuk be. 10. példa 5 10 15 20 25 30 23
