197354. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rekombináns DNS-t tartalmazó streptomyces kiválasztására.
26 197354 27 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy vektorként valamilyen fágot alkalmazunk. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy fágként pSVB3310 vagy 5 PSVB3311 fágot alkalmazunk. 6 Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy Streptomyces gazdasejtként ambofaciens, aureofaciens, griseofuscus, lividans, cinnamonensis 10 vagy toyocaenBÍ8 fajt alkalmazunk. 7. Eljárás rekombináns DNS klónozó vektor előállítására az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti módszerben való alkalmazáshoz azzal jellemezve, hogy 15- egy tilozin-rezisztencia-átvivö gént tartalmazó DNS szekvenciát, és- egy Streptomyces gazdasejtben funkcionális, replikálódó vagy integrálódó kiindulási anyagot ligálunk. 20 8. A 7. igénypont szerinti eljárás PSVB12 és pSVB23 plazmidok előállítására, azzal jellemezve, hogy a pSVB2 plazmid mintegy 2,6 kb-s Kpn I restrikciós fragmensét és a pIJ702 plazmid Kpn I-gyel emésztett anya- 25 gát ligáljuk. 9. A 7. igénypont szerinti eljárás pSVB16 és pSVB18 plazmidok előállítására, azzal jellemezve, hogy a pSVB2 plazmid mintegy 3,8 kb-s Pst I restrikciós fragmensét és 30 a pIJ702 plazmid Pst I-gyel emésztett anyagát ligáljuk. 10. A 7. igénypont szerinti eljárás PSVB20 és pSVB22 plazmidok előállítására, azzal jellemezve, hogy a pSVB2 plazmid mint- 35 egy 2,9 kb-s BawBl-BgRl restrikciós fragmensét és a pIJ 702 plazmid BgEI-vel emésztett anyagát ligáljuk. 11. A 7. igénypont szerinti eljárás PSVB3310 és pSVB3311 plazmidok elóállitásá- 4g ra, azzal jellemezve, hogy a pSVB2 plazmid mintegy 3,8 kb-s Pst I restrikciós fragmensét és a pKC 331 plazmid mintegy 3,8 kb-s Pst I restrekciós fragmensét ligáljuk. 12. Eljárás tilozin-rezisztens Streptomyces gazdasejtek előállítására eredetileg tílozinra érzékeny Streptomycesekből, azzal jellemezve, hogy valamely tilozinra érzékeny Streptomyces törzset a 7-11. igénypontok bármelyike szerinti plazmiddal vagy tággal transzformálunk. 13. A 12. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Streptomycesek közöl ambofaciens, aureofaciens, griseofuscus, lividar.s, cinnamonensis vagy toyocaensis fajból származó törzset transzformálunk. 14. A 12. vagy 13. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy pSVB2, PSVB12, pSVB23, pSVB16, pSVB18, pSVB20 vagy pSVB22 plazmiddal, vagy pSVB3310 vagy pSVB3311 fággal transzformálunk. 15. Eljárás pSVB2 plazmid izolálására, azzal jellemezve, hogy pSVB2 plazmiddal transzformált Streptomyces spórákat tenyésztünk, amig a korai stacionárius fázist elérjük, a tenyészetet homogenizáljuk, tiosztreptont tartalmazó tenyésztő tápközeget inokulálunk a homogenizált tápközeggel, az inokulált tápközeget a stacionárius fázis eléréséig inkubáljuk, az inkubált sejteket lizáljuk, és a pSVB2 plazmidot hagyományos módon elkülönítjük és tisztítjuk. 16. Eljárás pLJ702 plazmid izolálására, azzal jellemezve, hogy pIJ702 plazmiddal transzformált Streptomyces spórákat tenyésztünk, amíg a korai stacionárius fázist elérjük, a tenyészetet homogenizáljuk, tiosztreptont tartalmazó tenyésztő tápközeget inokulálunk a homogenizált tápközeggel, az inokulált tápközeget a stacionárius fázis eléréséig inkubáljuk, az inkubált sejteket lizáljuk, és a pIJ702 plazmidot hagyományos módon elkülönítjük és tisztítjuk. 10 ábraoldal A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 90.2044.66-4 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Benkő István vezérigazgató 15
