197349. lajstromszámú szabadalom • Eljárás növekedési hormonok kifejezésére használható klónozó vektorok előállítására
37 197349 38 2) egy E. coli lipoprotein kifejeződést szabályozó szekvencia 5’-nem-transzlalált régiója, és 3) egy transzlációs start kodon, amelyet egy A) humán vagy bovin növekedési hormont meghatározó szekvencia, vagy B) egy enterokináz hasítási helyet meghatározó nukleotid-szekvencia, amelyhez közbenső kodonok nélkül egy hu- 10 mán vagy bovin növekedési hormont meghatározó nukleotid-szekvencia kapcsolódik, követ és kívánt esetben d) egy E. coli lipoprotein kifejeződést szabályozó szekvencia 3’-nem-transzlatált szakaszának egészét vagy egy részét, ahol a nem-transzlatált szakasz jobbra haladva humán vagy bovin növekedési hormont leíró szekvenciához kapcsolódik, és kívánt esetben e) egy E. coli lipoprotein kifejeződést szabályozó szekvencia transzkripciós terminációs régiójának egészét vagy egy részét, ahol a transzkripciós terminácíós régió jobbra haladva kapcsolódik az 25 idegen proteint kódoló szekvenciához, és kívánt esetben f) egy E. coli lipoprotein kifejeződést szabályozó szekvencia transzkripciós terminációs régiójának egészét vagy egy ré- 30 szét, ahol a transzkripciós terminácíós szakasz jobbra haladva kapcsolódik az adott 3'-nem-transzlatált régióhoz. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy enterokinázzal hasítható 35 helyként Asp-Asp-Asp-Asp-Lys aminosav-szekvenciát meghatározó kodonokat tartalmazó szekvenciát alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy enterokináz hasitási helyet 40 kódoló dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciaként az alábbival azonos szekvenciát alkalmazunk: GATGATGATGATAAG CTACTACTACTATTC. 4. A 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az enterokináz hasítási helyként Phe-Pro-Leu-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys aminosav szekvenciát kódoló szék- 50 venciát alkalmazunk. 5. Az 4. igénypont szerinti eljárás, azzal ' jellemezve, hogy enterokináz hasitási hely dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciá jaként az alábbi kodonokat tartalmazó szekvenciát al- 55 kalmazunk: TTC CCATTGGATGATGATGATAAG AAGGGTAACCTACTACTACTATTC. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás hu- 5 mán növekedési hormont kifejező plazmid előállítására, azzal jellemezve, hogy a) a pNM645 plazmid előállítására a pNM575 plazmid 691 bázispárból álló BamHI fragmensének 538 bázispárból álló FnuDII fragmensét, a pKEN021 plazmid alkalikus foszfatázzal kezelt BamHI-Xbal fragmensét és a humán növekedési hormont meghatározó régióhoz kapcsolt, az lpp promoter régiót tartalmazó szintetikus kétszálú dezoxiribonukleinsav-15 fragmenst összekapcsoljuk, vagy b) a pNM736 plazmid előállítására a pBR322 617 bázispárból álló Hindlll-Sall fragmensét hozzákapcsoljuk a pNM645 plazmid tompa végű BamHI fragmenséból Sáli emésztéssel ka-20 pott legnagyobb fragmenséhez, vagy c) a pNM702 plazmid előállítására összekapcsoljuk a pNM575 plazmid 691 bázispárból álló BamHI fragmenséból FnuDII emésztéssel kapott, 538 bázispárból álló fragmensét, a pKEN21 plazmid alkalikus foszfatázzal kezelt BamHI-Xbal fragmensét, és tandem elhelyezkedésben az lpp promoter régiót, a start kodont, enterokináz által felismerhető és hasítható rövid peptidet meghatározó kodonokat tartalmazó régiót, és humán növekedési hormont meghatározó szekvenciát tartalmazó szintetikus kétszálú dezoxi-ribonukleinsav-fragmenst. 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás bovin növekedési hormont kifejező plazmid előállítására, azzal jellemezve, hogy a) a pKEN797 plazmid előállítására a pNM685 plazmid részleges PvuII emésztésével kapott fragmenséból kapott legnagyobb fragmenst, egy 42 bázispárból álló szintetikus dezoxi-ribonukleinsav-fragmenst, és pBP348 plazmid 135 bázispárból álló PvuII fragmensből Hpall emésztéssel kapott 46 bázispárból álló fragmenst összekapcsoljuk, vagy 45 b) a pNM789 plazmid előállítására összekapcsoljuk a pBP348 PvuII emésztéséből kapott 494 kb-s fragmentuméból és a pNM702 plazmid részleges emésztéséből kapott fragmentum ligélésával kialakított intermedier plazmid legnagyobb, alkalikus foszfatázzal kezelt részleges PvuII-Xbl emésztéssel kapott fragmensét, egy 63 bázispárból álló szintetikus dezoxiribonukleinsav-fragmenst, és pBP348 plazmid PvuII emésztéssel kapott, 135 bázispárból álló fragmenséból részleges Hpall emésztéssel nyert, 46 bázispárból álló fragmensét. 13 rajz A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 20 90.2043.66-4 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Benkő István vezérigazgató
