197212. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírus- és daganatellenes hatású gyógyszerkészítmények előállítására
11 197212 12 tűk, és például HSV-l-el fertőzött humán embrió-tüdő egybefolyó sejtjei esetében igen kifejezett gátló hatást figyeltünk meg. Ugyanezt a hatást értük el, amikor D609 helyett D424-et, D611-et vagy D622-t használtunk. Ügy találtuk, hogy az előzőekben ismertetett hatóanyag-kombináció RNS-virusokat (egyfonalas vírusokat), igy például a hólyagos szájnyálkahártya-gyulladást okozó vírusokat gátolja. A kővetkezőkben azt a kísérletet ismertetjük, amelyben a találmány szerinti kombináció és az adjuvóns szer gyógyító hatását tengeri malacon HSV-vel előidézett sérülésen tanulmányoztuk. A 4. táblázatban ismertetett anyagokat a megadott koncentrációban vazelin-alapú kenőcs formájában a tengeri malac HSV által fertőzött bőrfelületére naponta kétszer alkalmaztuk. Az eredményeket a 4. táblázatban foglaltuk össze. 4. táblázat A vizsgált a sérülések száma anyag a kezelés 36 őrágyókezdetekor val a gyű(96 órával kezelés lási a fertőzés után % után) vazelin 10% 8 8 dekónsavval 10 10 0 9 9 vazelin 5% 6 4 DEXA-val és 23 14 10% dekán-16 5 42 savval 11 8 8 6 Az előbbi táblázat adataiból kitűnik, hogy a legjobb gyógyulási eredményt a találmány szerinti kombinációval értük el. A kombináció vírusellenes hatását hat Wal-HSV-l-el fertőzött tengerimalacon is megvizsgáltuk. A kétszeri napi kezelést 5% DEXA-t és 5% dekánsavat tartalmazó vazelinalapú kenőccsel a fertőzés után 18 órával kezdtük el. Két napos kezelés után (vagyis 72 órával a fertőzést követően) az állatokat leöltük és a fertőzött bőrt eltávolítottuk. A bőrt cseppfolyós nitrogénnel megfagyasztottuk, majd .Mikro Dismembrator' (tra) (roikro-aprító) berendezéssel finomra őröltük - állatonként két mintát készítettünk - és tízszeres mennyiségű (tömeg/térfogat szerint) szöveti táptalajon összegyűjtöttük. Rövid centrifugálást követően - Eppendorf - pultos csúcs-centrifugán 1 percen át - meghatároztuk a felülúszó réteg virus titerét. A vizsgálat szerint vírus nem mutatható ki. A vakkontroil érték szövetenként lxlO5 pfu/gramra értéknek adódott. A különböző monokarbonsavak D609 jelzésű anyaggal készített kombinációiban a monokarbonsavak szénlánc-hosszúságának a vírusellenes hatásra és a citotoxicitásra kifejtett hatásét a 3. ábrán mutatjuk be. HSV-1- -el fertőzött (W) és nem fertőzött (a) Rita-sejteket pH=7,4 értéken 10 jug/ml D609-et és mindegyik monokarbonsav esetében 40 jug/ml monokarbonsavat tartalmazó kombinációkkal kezeltük. A vírus-hozamot kettős kísérletben, plaque-technikával a két kultúrában külőn-külőn meghatároztuk. A hibahatárokból következtettünk a standard deviációra. A kettős nem fertőzött kezelt és nem kezelt Rita sejttenyészetekben a sejt-sűrűséget tripán kékkel végzett festést követően hematocitométerrel határoztuk meg. 3. A daganatellenes hatás vizsgálata Vyirokeredetü leukémiás egereket kezeltünk. 6 hetes DBA-2 egereket lxlO5 NCI-Egg típusú leukémiasejtekkel intravénásán fertőztünk meg. 18 órával később egyenként 10 állatból álló három állatcsoportot képeztünk. Az egyik csoport, amely semmiféle kezelést sem kapóit, képviselte a kontrollcsoportot. A második csoportot csak DEXA-val (4x15 mg/kg, majd 6x11 mg/kg) kezeltük. A harmadik csoportot a találmány szerinti kombinációval - DEXA-val és undekánsavval (a DEXA-t a második csoportnál leirt módon és ehhez további 4x7,5 mg/kg, majd 6x5,5 mg/kg undekánsavat adva) - végeztük. Valamennyi kezelést óránként, intravénás injekció formájában végeztük. A következő napon (2 nappal a daganatsejtekkel végzett fertőzés után) mindegyik állattól vért vettünk, s meghatároztuk a limfocita koncentrációt. Az eredményeket az 5. táblázatban foglaltuk össze. 5. táblázat limfocitaszám x 10~6/ral kezeletlen DEXA DEXA + + undekánsav 13.8 17.9 8.6 11.1 15.0 11.7 15.8 24.1 12.0 17.3 13.0 9.8 12.0 18.6 12.8 15.7 15.6 18.4 23.0 10.7 11.6 18.3 14.6 12.4 20.2 13.7 8.4 10.8 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
