196972. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új kinazolin származékok és hatóanyagként ezen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
9 196 972 10 (2) Eljárás az enzim-oldat előállítására Nyulak szemét kivesszük és a lencséket izoláljuk. A lencséket 3 térfogat desztillált vízzel 4 °C-on homogenizáljuk (valamennyi ezután következő műveletet is 4 ’C-on végezzük) és 60 percig centrifugáljuk (10000 G). A felülúszó részt 2 liter 0,05 M sóoldat ellenében dializáljuk, és a dializált oldatot használjuk mint enzim-oldatot. (3) Kísérleti vegyületek 1. 2 - [3 - (3,4 - diklór - benzil) - 1,2,3,4 - tetrahidro - 2,4 - dioxo - kinazolin - 1 - il] - ecetsav (A vegyület), 2. 2 - [3 - (4 - bróm - 2 - fluor - benzil) - 1,2,3,4- tetrahidro - 2,4 - dioxo - kinazolin - 1 - il] - ecetsav (B vegyület), 3. 2 - [3 - (4 - bróm - 2 - fluor - benzil) - 1,2,3,4 - tetrahidro - 7 - metoxi - 2,4 - dioxo - kinazolin - 1 - il] - ecetsav (C vegyület), 4. 2 - [3 - (2 - fluor - 4 - jód - benzil) - 1,2,3,4 - tetrahidro - 2,4 - dioxo - kinazolin - 1 - il] - ecetsav (D vegyület), 5. 2 - [7 - bróm - 4 - (4 - bróm - 2 - fluor - benzil] - 1,2,3,4 - tetrahidro - 2,4 - dioxo - kinazolin - 1 - il] - ecetsav (E vegyület). (4) Kísérleti eredmények Az eredményeket az alábbi táblázat szemlélteti. Mindegyik IC50-érték (M) a találmány szerinti vegyületek azon koncentrációja, amely az aldóz reduktáz aktivitást 50%-ban gátolja. * 1 Kísérleti vegyületek IC50 (M) A vegyület 5,4X10~9 B vegyület 4,8Xl0-9 C vegyület 5,4 Xl0~9 D vegyület 5,3X10~9 E vegyület 5,1X10~9 (B) In vivo teszt A gyógyszer inhibitor hatása a szorbit felszaporodására az ülőidegben. (1) Kísérleti eljárás Hím, 6 hetes Sprague-Dawley patkányokat 24 órán át koplaltattunk, majd 2 mM citrát-pufferban (pH = 4,5) oldott sztreptozot cin (75 mg/kg) intraperitoneális injekciójával (2 ml/kg) az állatoknál diabetest idéztünk elő. Hét nappal a sztreptozotocin injekció után az állatok farokvénájából vért vettünk és a vér glükózértékét mértük. Azokat a patkányokat, amelyeknél a vér glükózértéke nagyobb volt, mint 300 mg/di, használtuk mint sztreptozötocinnal előidézett diabetikus állatokat. A diabetikus állatokat találomra két csoportra osztottuk (az A és B csoportra). A kísérleti vegyületet 0,5%-os vizes metilcellulóz-oldatban szuszpendáltuk, és az A csoportbeli patkányok mindegyikének beadtuk orálisan, naponta egyszer, öt napon át (ezek a következőkben a gyógyszerrel kezelt diabetikus patkányok). A B csoport valamennyi patkányának és normál patkányoknak oldószert (0,5%-os vizes metilcellulóz-oldatot) adtunk (ezek a kezeletlen, diabetikus patkányok, illetve kontroll patkányok). A gyógyszer vagy az oldószer utolsó beadása után 6 órával az állatokat leöltük és az ülőideg szorbittartalmát meghatároztuk. A gyógyszer százalékos gátló hatását a szorbit felhalmozódására az ülőidegben a következő egyenlettel számoltuk ki: I% - (Sí) *100’ az egyenletben I gátló hatás, %, S szorbittartalom a kezeletlen diabetikus patkányok ülőidegében, Su szorbittartalom a gyógyszerrel kezelt diabetikus patkányok ülőidegében, N szorbittartalom a kontroll patkányok ülőidegében. (2) Kísérleti vegyületek 1. D vegyületek 2. E vegyület 3. F vegyület (2 - [3 - (4 - bróm - 2 - fluor - benzil) - 7 - klór - 1,2,3,4 - tetrahidro - 2,4 - dioxo - kinazolin - 1 - il] - ecetsav (3) Kísérleti eredmények Kísérleti vegyület Dózis 1(%) (gyógyszer) mg/kg D vegyület 32 101 E vegyület 32 103 F vegyület 32 99 A gyógyszerkészítmények különböző formájüak lehetnek, így szilárd készítmények, félig szilárd készítmények és folyékony készítmények, amelyek tartalmaznak egy találmány szerinti hatóanyagot, vagyis egy (I) általános képletű vegyületet vagy gyógyszerészetileg elfogadható bázisos sóját, egy külső, belső vagy helyi alkalmazásra megfelelő szerves vagy szervetlen hordozó- és/vagy kötőanyaggal. A hatóanyagot ártalmatlan és gyógyszerészetileg elfogadható segédanyagokkal keverve használjuk, s ezekkel megfelelő dózisformákat, így tablettákat, pirulákat, kapszulákat, kúpokat, oldatokat, emulziókat, szusz penziókat stb. állítunk elő. A szilárd, félig szilárd és folyékony készítmények 5 10 15 20 25 30 35 40 45 5C 55 60 65 6
