196915. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és berendezés oldatban lévő egy vagy több komponens elkülönítésére kromatográfiás úton
11 196 915 12 A mintákat a továbbiakban kvantitatív analízisnek vetjük alá, úgy, hogy a különböző frakciókat 110 °C-on megszorítjuk és a száraz maradékot megmérjük. A maradékokhoz vakpróbát végeztünk ügy, hogy 100 pl mintát vettünk kémcsőbe és 110 °C-on megszántottuk. A szilárd maradék súlya 68,5 mg. A különböző szárított frakciók súlyát a 2. táblázat szemlélteti. Az 1. kísérlet után a 2. kísérlethez az oszlopot semlegesre mostuk és semlegesítettük. 2. táblázat Ioncserés szétválasztás dinamikus kromatográfidval Kísérlet Frakció száma száma Eluens A szárított frakció tömege (mg) Összes tömeg (mg) Megjegyzés 1 HjO 43,0 2 h2o 0,2 3 h2o 0 43,2 * 4 2nHCl 0,5 5 2 n na 15,2 6 2 n HQ 27,5 7 2 n HQ 3,2 8 2 n HQ 1,3 47,7 * * színtelen frakció A szárí-Kísérlet Frakció száma száma Eluens tott frakció tömege (mg) Összes tömeg (mg) Megjegyzés 2. 1 h2o 44,2 2 h2o U 3 HjO 0,1 45,3 + 4 2 n Ha 0,4 5 2 n HO 2,3 6 2 n Ha 34,0 7 2 n HO 5,7 8 2 n HO 0,8 43,2 ♦ * színtelen frakció A fenti eredményekből látható, hogy miután nyolc frakció átszivárgóit az adszorbensen, lényegileg az összes vegyületet eltávolítottuk és szétválasztottuk. Abból a célból, hogy rámutassunk a találmány szerinti dinamikus-oszlopos folyadékkromatográfia hatásosságára, összehasonlító kísérletet végeztünk hagyományos, gravitációs áramlásit kromatográfiát alkalmazva, azonos mennyiségű, 100 pl mintával és azonos adszorbenssel. Az eredményeket a 3. táblázat szemlélteti. 3. táblázat Ioncserés szétválasztás hagyományos kromoatogrdfids oszlopot alkalmaz va 5 A szárított Frak- frak- Összes ció Eluens ció tömeg Megjegyzés száma törne- (mg) 10 gc (mg) 15 20 25 30 1 h2o 0,8 2 h2o 50,3 3 HjO 1,3 4 HjO 0,5 5 h2o 0,2 6 h2o 0,3 7 h2o 0,4 8 h2o 0,1 9 h2o 0,3 10 h2o 0,4 11 h2o 0,1 12 h2o 0,3 13 h2o 0,1 14 2n Ha 0,0 15 2n Ha 2,3 16 2 n HO 23,0 17 2 n HO 12,7 18 2 n Ha 3,3 19 2 n HO 1,4 20 2n HO 1,4 54,9 színtelen frakció 44,1 színtelen frakció 35 3. példa Ebben a kísérletben 100 pl 30—35 % jelzett jó- Jot (*J2) tartalmazó béta-hCG-oldatot (humán koriongonadotrop hormon) választottunk szét dina- 40 mikus-oszlopos folyadékkromatográfiával, Sephadex G-10 adszorbenst használva. Az eluálást 10 ml, körülbelül 8 pll-érlékű puffénál végeztük. Minden egyes frakció körülbelül 0,4 ml térfogatú. Az eredményeket a 4. táblázat szemlélteti. 45 4. táblázat ’Jj-tartalmú béta-hCG elválasztása Sephadex G-10 adszorbensen, 50 kb. 8 pH-értékűpuffénál eluálva 55 Frakció száma Vakpróba Percenkénti számlálás (cpm) Összesen 60 65 1 29,0 0 2 9348,0 9578,0 3 1946,0 1062,8 4 292,0 267,7 5 130,0 104,8 6 114,0 84,5 7 108,0 82,0 8 78,0 48,2 12125 cpm 7
