196845. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-21978C-származékok előállítására
1 2 196 845 Alkotórész Mennyiség Triptikáz szója lé+ 3,0 Dextrin 2,5 Víz (deionizált) 94,5 + Baltimore Biological Laboratories, Cockeysville MD. Az inokulált táptalajt 250 ml-es Erlenmeyer lombikban, 30°C-on, 48 óráig inkubáljuk körkörös rázógépen, amelynek fordulatszáma 5 cm átmérőjű íven 250 ford/perc. A kifejtett vegetatív kultúrát steril kémcsövekbe visszük át (0,5 ml/cső) és folyékony nitrogén gőzfázisban tároljuk. Abból a célból, hogy nagyobb mennyiségű egységes tárolt anyagot kapjunk, 1 ml folyékony nitrogén gőzfázisában tárolt kultúrával 80 ml fent leírt vegetatív táptalajt inokulálunk. A táptalajt 250 ml-es Erlenmeyer lombikban 30°C-on, 48 óráig 5 cm átmérőjű íven 250 ford/perc sebességgel mozgó rázógépen inkubáljuk. Az így kapott tenyészet 10 ml-ével 450 ml második fázisú vegetatív táptalajt inokulálunk, amely táptalaj összetétele a fent megadott. A második Jfázisú közeget 2 1-es Erlenmeyer lombikban 30°C-on, 24 óráig, egy 5 cm átmérőjű íven 250 ford/perc sebességgel mozgó rázógépen inkubáljuk. 1 liter második fázisú vegetatív tenyészettel inokulálunk 39 1 steril harmadik fázisú kifejlesztő táptalajt, amelynek összetétele az alábbi: Alkotórész Mennyiség Szójabab liszt 0,5 Élesztő extraktuma 0,5 Kálcium-glükonát 1,0 KClb 0,02 MgS04.7H2Ob 0,02 FeS04.7 H20b 0,0004 Sag 471 (habzásgátló)c 0,03 Viz 97.9296 aDifco Laboratories, Detroit MI b A nyom ásványi sók az alábbi módon készültek: 7,6 g FeS04.7 H20-t oldunk 76 ml tömény só-5 10 15 20 25 30 35 40 savban. Ehhez 380 MgSCL . 7H20 és 380 g KC1 adunk majd a térfogatot 3800 ml-re egészítjük ki ionmentes vízzel. Hogy a megadott ásványi só koncentrációt kapjuk, minden 39 1 harmadik fázisú kifejlesztő fermentációs táptalajhoz 80 ml ilyen oldatot adunk. c Union Carbide, Danbury CT. Az inokulált táptalaját 24 óráig rozsdamentes acél edényben 30°C-on inkubáljuk. Az edényt 0,85 térf/térf/perc sebességgel, steril levegővel levegőztetjük és szokásos keverőkkel 250-450 ford/perc sebességgel keverjük. A berendezésben a nyomást 3,5 . 104 Pa értéken tartjuk. Egy liter inkubált harmadik fázisú inokulummal beoltunk 119 1 steril termelő táptalajt, aminek összetétele az alábbi: Alkotórész Mennyiség (%) Szójaliszt 2,2 Fe/NH4/2(S04)2.6H20-0,066 , Dextróz 0,825 Sag 471 0,022 Burgonya dextrin 3,3 Melasz (sötét) 0,275 Csapvíz 93,312 * A pH értékét az első két alkotórész beadagolása után 7,0-re állítjuk be, majd ezt a pH beállítást valamennyi alkotórész beadagolása után is elvégezzük a sterilizálás előtt. Az inokulált termelő táptalajt rozsdamentes acél edényben 30°C-on hat napig inkubáljuk, miközben 0,5 térf/térf/perc levegőztetés alkalmazunk. A táptalajt szokásos keverőkkel a 0-15 óra során 250 ford/perc sebességgel, ezután pedig 350 ford/ perc sebességgel keverjük. A pH értékét ammónium-hidroxid-oldat hozzáadásával körülbelül 6,5 értéken tartjuk. Az A21978C komplex termelése a fermentáció végén 0,282 g/1 táptalaj volt. A komplexet a 180.476 sz. magyar szabadalmi leírás szerint izoláljuk és választjuk szét. A faktor-elosztást az I. táblázatban írjuk le. A nyert komplex mennyisége a 180.476 sz. magyar szabadalmi leírásban kapottnak (0,06 g/1) kb. ötszöröse. Az A21978C komplex és faktorai (Na-só alakjában) KBR pelletben felvett IPR-spektruma a következő: 45 KOMPLEX C0 C1 C2 —3 C4 C5 3310 3300 3300 3300 3310-3320 3300 3050 3050 3040 3050 3040 3050 3045 2910 2910 2910 2910 2910 2920 2910 2840 2840 2840 2840 2835 2850 2840 1655 1650 1650 1665 1650 1655 1650 1540 1540 1535 1535 1535 1525 1525 1450 1445 1450 1450 1450 1455 1445 1395 1310 1395 ' 1395 1400 1395 1395 1390 1240 1215 1220 1225 1225 1220 1215 1160 1155 1160 1160 1160 1160 1155 9
