196827. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szteroid-észterek és ezeket tartalmazó liposzómák előállítására
1 2 ezért a fázis-átmeneti hőmérsékletük különböző. Például tojásból és szójababból származó, valamint szintetikus lecitineket, így dimirisztoil-foszfatidil-kolint (DMPC), dipalmitoil-foszfatidil-kolint (DPPC) és diasztearoil-foszfatidil-kolint (DSPC) használtunk. A szerkezeti lecitinek manipulálásával a biológiai lebontás szempontjából változó tulajdonságú szilárd hordozókat készíthetünk. Ez lehetőséget ad a befogott szteroid-észter leadásának késleltetésére. A szteroid-észter és például a dipalmitoil-foszfatidil-kolin (DPPC) hólyagocskák kölcsönhatásának mértéke az észter lánchosszúságától függ, és azt figyelték meg, hogy a lánc hosszabbodása a kölcsönhatás növekedését okozza. A koleszterin vagy koleszterinszármazékok liposzóma-készítményekbe való foglalása igen általánossá vált, mivel növelik a liposzóma stabilitást. A találmány szerinti liposzómák előállításának első lépéseit az irodalomban leírt módon végezhetjük, például úgy, hogy a komponenseket oldószerben, például alkoholban vagy kloroformban oldjuk, majd az oldószert lepároljuk. A kapott lipidréteget aztán a kiválasztott vizes közegben diszpergáljuk, majd az oldatot rázzuk vagy szonikáljuk. A találmány szerinti liposzómák előnyösen 0,1 és 10 fim közötti átmérőjűek. A fő liposzóma-képző lipid mellett, ami általában foszfolipid, más lipideket (például koleszterint vagy koleszterin-szterátot) a teljes lipid mennyiségre számítva 0—40 t%-ban alkalmazhatunk a liposzóma-memorán szerkezetének módosítása érdekében. A liposzómafelvétel optimalizálására egy harmadik, negatív töltést biztosító (például foszfatidinsavat) vagy pozitív töltést biztosító (például sztearil-amin-acetát vagy acetil-piridinium-klorid) komponenst is adhatunk a készítményhez. Az előállítás során a szteroid-észter és a lipid aránya széles határok között változhat az alkalmazott lipidtől és körülményektől függően. A liposzómák szárítása (fagyasztva szárítás, permetezve szárítás) laktóz jelenlétében a végső készítményre számítva 0 és 95% laktóztartalom mellett történhet. A találmány szerinti igen előnyös készítmény liposzómákat és budezonid-21-palmitátot tartalmaz. Az adagolás por-eroszolok, becseppentés, aeroszol és nyomás alatti aeroszolok formájában történhet. Szteroid-észterek előállítása A találmány a továbbiakban a következő, nem korlátozó jellegű példákkal szemléltetjük. A tömegspektrumokat kémiai ionizációs tömegspektrometriás úton (CH4 gáz) készítettük, és minden spektrum összhangban van a vegyületek molekulasúlyával. Minden vegyidet tisztaságát HPLC (High Performance Liquid Chromatography) technikával határoztuk meg (oszlop: Bondapak C18j 300x3,9 mm belső átmérő, átfolyási sebesség: 1,0 ml/perc, mobil fázis: etanol és víz 70:30 és 90:10 között változó térfogatarányú elegye) 1 1. példa Budezonid-21-palmitát (B/ eljárás) 1 mmól budezonidot 20 ml piridinben oldunk. 2 mmól palmitoil-kloridot adunk hozzá 0 °C-on, és aztán az elegyet szobahőmérsékleten hagyjuk állni egy éjszakán át, Jeges hűtés közben 2 mólos sósavat adurik az elegyhez savas kémhatásig, majd 3x50 ml kloroformmal extraháljuk. A szerves fázist 5%-os nát. rium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A nyersanyagot preparatív vékony-rétegkromatográfiás módszerrel tisztítjuk (kovasavgél, etanol kloroform = 3:9). Hozam:40%. Tisztaság: 95,5%. MS-C1(CHL,): MH* = 669, M+ ♦ 29 = 697. 2. példa Budezonid-21-laurát (N/ eljárás) 0,5 mmól budezonidot 0,25 ml lauril-kloriddal reagáltatunk 3 ml piridinben, az 1. példában leírtak szerint. Preparatív vékonyréteg-kromatográfiás tisztítás után (kovasavgél, etanol : kloroform 3.97) a cím szerint terméket kapjuk. Hozam: 47%. MS-CI(CH4): Mir = 613, M+* 29 = 641. 3. példa Budezonid-21-mirisztát (B/ eljárás) 7,0 g mirisztinsavat és 9 ml tionil-kloridot 100 ml triklór-etilénben 3 órán át forralunk. Az oldószer lepároljuk, így mirisztoil-kloridot kapunk. 2 mmól budezonidot és 2,4 mmól mirisztoil-kloridot 40 ml metilén-kloridban reagáltatunk 2,4 mmól trietil-amin 10 ml metilén-kloriddal készült oldatával 2 órán át, szobahőmérsékleten. Az elegyhez metilén-kloridot adunk, és a szerves fázist 1 mólos sósavval és 3x100 ml vízzel mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk. Az oldószert lepároljuk, és a maradékot Sephadex LH20 oszlopon kloroformmal kromatografáljuk, így a cím szerinti vegyületet 65%-os hozammal kapjuk .Tisztaság: 98,2%. MS-CI(CH4): MH4 ♦ 29=669. 3b) példa Budezonid-21-mirisztát (C/ eljárás) 0,5 mmól a CA 57, 13482d (1962) irodalmi helyen leírt módon készített budezonid-21-mezilátot, 0,5 mmól mirisztinsavat és 0fe5 mmól trietil-amint 10 ml dimetil-formamidban 50 C-on, 2 órán át keverünk. Az oldószert vákuumban lepároljuk, és a B) eljárásnál leírt módon dolgozzuk fel az elegyet. így a kromatografálás után a cím szerinti, a B/ eljárással kapottal azonos vegyületet különítünk el. 3c) példa Budezonid-21-mirisztát (A/ eljárás) 1 mmól budezonidot, 1 mmól mirisztinsavat és 5 mg p-toluolszulfonsavat 30 ml benzolban 5 órán át forralunk. A szerves fázist egymást követően 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal és vízzel mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. Preparatív vékonyrétegkromatográfiás módszerrel tisztítva a cím szerinti vegyületet kapjuk, amely azonos a Bj eljárással előállítottal. 4. példa Budezonid-21-szterát (B/ eprás) 1 mmól budezonidot 1,0 ml sztearoil-kloríddal 6 ml piridinben reagáltatunk az 1. példában leírt módon. A preparatív vékony-rétegkromatográfiás tisztítás után (kovasavgél, etanol kloroform = 3:97) a cím szerinti vegyületet kapjuk. Hozam: 74%. MS-CI(CH4); MH* = 697. M+ + 29 = 725. 5. példa Budezonid-21-oleát (B/ eljárás) 1,16 mmól budezonidot és 1,4 mmól oleoil-klori-196.327 5 10 15 20 25 30 35 zsO 45 50 55 »50 3
