196825. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 10-szubsztituált szteroidok és ilyeneket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 196.825 trietil-amin jelenlétében), amikoris 860 mg kivánt terméket nyerünk, amely 5alfa-hidroxi-10béta-(/4- -metil-fenil/-metil)-izomer, ezen kívül még 80 mg 5béta-hidroxi-10alfa-(/4-metil-fenil/-metil)-izomert is kapunk. D. lépés: 17béta-hidroxi-10béta-(/4-metil-fenil/-metil)-l 7alfa-/3-hidroxi-l-propinil/-ösztra-4,9(l l)-dién-3-on 1,7 g fenti 5alfa-hidroxi-10béta-(/4-metil-fenil/-metil)-Í7.omert 30 ml etanolban oldunk, hozzáadunk 7,5 ml 5 n sósavat és 50°C hőmérsékleten 1 órán át melegítjük. A reakciókeveréket ezután jeges vízbe öntjük, koncentrált ammóniával meglúgosítjuk, etil-acetáttal extraháljuk, a szerves fázist vízzel, majd telített vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, szárítjuk és csökkentett nyomáson betöményítjük. Ily módon 1,3 g nyersterméket kapunk, antylyet metilén-kloridból átkristályosítunk Op.: = 213 C [a]D = *13° ± 1° (c = 1%, CHCI3) Elemanalízis a C29H34O3 összegképletű vegyület-re (M = 430,59) számított: C% 79,95, H% 7,87 C.% 1,17 mért: C% 80,0 H%7,9 C% 1,2 19. példa 21 -Klór-17béta-hidroxi-10béta-(/4-metil-fenil/-metil)-19-nor-l 7alfa-pregna-4,9( 11 )-dién-20-in-3-on A. lépés: 3,3-etiléndioxi-21-klór-5alfa,17béta-dihidroxi-10béta-(/4-me til-fen il/-me til)-19-nor-17alfa-pregnant l)-én-20-on a) Litium-klór-acetilid előállítása 3,3 ml 0,003 mólos éteres fenil-lítium-oldatot adagolunk 3 perc alatt 5,5 ml 5°C hőmérsékletre lehűtött éterhez, majd 6 perc alatt 0,12 ml transz-1,2- -diklór-e^ílént adunk hozzá, miközben a hőmérsékletet 10°C alatt tartjuk. Ezután az elegyet hagyjuk szobahőmérsékletre emelkedni és ott 40 percig keverjük. b) 0,218 g 3,3-etiléndioxi-5alfa-hidroxi-10béta-(/4- -metil-fenil/-metil)-ösztra-9(l l)-én-17-ont 2,2 ml tetrahidrofuránban oldi/nk, hozzáadjuk az a) lépésnél kapott szuszpenzióhoz és környezeti hőmérsékleten 16 órán át keverjük. Ezután 5,5 ml telített, vizes ammónium-klorid-oldatot adunk hozzá, a keverést még 10 percig folytatjuk, dekán táljuk, etil-acetáttal extraháljuk, a szerves fázist telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, szárítjuk, bepároljuk és a maradékot szilikagélen kromatografáljuk (eluens: petrol-éter /f. p. 40-70°C/ - etil-acetát + 1% trietil-amin), amikoris 0,194 g kívánt terméket nyerünk. B. lépés: 21-klór-17béta-hidroxi-10béta-(/4-metil-fenil/-metil)-19-nor-17alfa-pregna-4,9(ll)-dién-20- -in-3-on 3,5 g A. lépés szerinti terméket 105 ml etanolb^n oldunk, hozzáadunk 42 ml 50%-os sósavat, majd a kapott reakcióelcgyet 55°C-on 4 órán át keverjük. Ezután lehűtjük, vizet, majd 20 ml koncentrált ammóniát adagolunk, elválasztjuk, vízzel mossuk, szárítjuk, betöményítjük. A visszamaradó anyag 2,62 g kívánt termék. Op.: = 254°C, [a] n = +13° ± 1° ( c = 1%, CHCI3). Elemanalízis a összegképletű végyület-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 re (M= 435,01), számított: C% 77,41 11% 7,18 Cl% 8,14 mért: C% 77,3 H% 7,3 Cl% 8,3 Farmakológiai vizsgálatok Találmány szerinti vegyületek aktivitásának vizsgálata hormon-receptorokon: I. nyúluterusz progesztogén receptorán: kb. 1 kg-os nemileg éretlen nyulaknak kután 25 g ösztradiolt adagoltunk. 5 nappal a kezelés után a kísérleti állatokat megöltük, méhüket eltávolítottuk, megmértük, és 0 C hőmérsékleten TS puffer-oldatban (10 mmólos trisz-sósav, 0,25 mól szacharóz, pH = 7,4) Potter-féle teflon-edényben, (1 g szövet/ 50 ml TS puffer) 0°C-on centrifugálással (105 000 g 90 perc) eloszlattuk. A felülúszó alikvot részét kivéve 0°C-on ideig konstans (T) koncentrációjú triciált 17,21 -dime til-10-nor-4,9-pregn adién-3,20-dionnal (R) inkubáltuk növekvő koncentrációjú (0- 2 500 xlO y mól) hideg R termék vagy hideg progeszteron vagy hideg vizsgálandó vegyület jelenlétében. A megkötött triciált R mennyiségét ezután minden inkubátumban mértük a dextrán-karbon adszorpciós eljárás segítségével. Patkány-thymus glucocorticoid receptorán: 160-200 g-os Sprague-Dawley EOPS patkányokon mellékvese-eltávolítást végeztünk, majd ezt követő 4-8 nap után az állatokat megöltük és thymusukat eltávolítottuk. A thymusokat 0°C hőmérsékleten TS puffer-oldatban (10 mmólos trisz-sósav, 0,25 mól szacharóz, 2 mmól ditiotreitol, pH = 7,4) Potter-féle poli(tetrafluor-etilén) edényben centrifugálással (105 000 g, 90 perc) eloszlattuk (1 g szövet/50 ml TS puffer). A felülúszó alikvot részét kivéve 0°C hőmérsékleten t ideig inkubáltuk konstans koncentrációjú (T) triciált dexametazonnal, növekvő koncentrációjú (0-2500 . 10’y mól) hideg dexametazon vagy hideg vizsgálandó oldat jelenlétében. A megkötött triciált dexametazon mennyiségét (B) ezután dextrán-karbon adszorpciós eljárás segítségével határoztuk meg. Relatív kötési affinitás (Relative Liaison Affinity, RLA) számítás Az RLA meghatározását minden receptro esetében azonos módon végeztük. A következő görbéket vettük fel: a megkötött triciált hormon százalékos mennyiségét (Bj a referencia hormon.log koncentrációjának függvényében ábrázoltuk és B -t a hideg vizsgálandó vegyidet log koncentrációjának függvényében ábrázoltuk. Felvettük a következő egyenletnek megfelelő egyenest: ^O'^max* ® min)/2,ahol max = aT koncentrációjú triciált hormon megkötött mennyisége százalékában min = a T koncentrációjú triciált hormon megkötött mennyisége százalékában, az inkubálást nagyfeleslegű (2500 x 10’v mól) hideg hormon jelenlétében végezve. Az Ií-q egyenes és a görbék metszéspontja adja a hideg referencia hormon (CH) és a vizsgálandó vegyület (CX) ama koncentrációját, amelynél a triciált 12
