196815. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új foszfino-szénhidrogén-származékok arany, ezüst- és rézkomponenseinek előállítására, valamint foszfino-szénhidrogén-származékok arany-, ezüst- és rázkomplexeit tartalmazó daganatos sejtek szaporodását gátló gyógyászati készítmények előállítására
9 196 E.15 10 Megjegyzések a 3. táblázathoz: ! a) A vegyülctek szerkezete a 2. táblázatban, az azonos számmal jelölt vegyületnél található b) ip. qD x 10 adagolás mellett B6D2F nőstény egerek számára maximális tűrhető dózis c) M5076 retikulumsejt szarkómát ip. viselő egerek maximális élettartam növekedése (a „per”-vonallal" elválasztott értékek külön vizsgálatok eredményeit jelentik) Néhány (1) általános képlctíí vegyüld citotoxikus hatását in vivo B16 melanomasejteken vizsgáltuk meg. 8-8 B6D2F, egérből álló csoportokat ip. 0,5 ml 10 t/térf%-os B16 melanomasejt tenyészettel fertőzünk be, amelyet C67B,/6 donor egerekből kimetszett összegyűjtött, 14-21 napos se. tumorból készítünk. A tumorsejtek beültetése után 24 órával kezdjük meg a kezelést és 10 napon át naponta végezzük. A vegyiileteket ip. adjuk be. Az egereket 60 napon át tartjuk megfigyelés alatt, az elhullást naponta feljegyezzük. A tumorellenes hatást az átlagos túlélési idő növekedésével értékeljük. Hatásosnak azokat a vegyületeket tekintjük, amelyek 5:25% élettartamnövekedést váltanak ki. Az ip. B16 melanomasejtekkel végzett in vivo vizsgálat eredményeit a 4. táblázatban ismertetjük. 4. táblázat A vegyület’“’ MTD Élettartam"’ száma (mg/kg)(b) növekedés(%) I. 2 50/43/33 4. 2 34/28 a) a vegyület szerkezete a 2. táblázatban, az azonos számmal jelölt vegyületnél található b) ip qD x 10 adagolás mellett B6D2FX egerek számára maximális tűrhető dózis c) B16 melanomasejteket hordozó egerek maximális élettartam növekedése (a „per”-vonallal elválasztott értékek külön vizsgálatokból származó eredmények) A 2. táblázatban 1. számmal jelölt vegyület hatását megvizsgáltuk in vivo emlő adenokarcima 16/c tumor modellen is. Ez a modell érzékeny DNS-kötő- és alki- Iczőszcrckre. Ebben a kísérletben a tumort C3H egerekbe ültetjük be szubkután és a vizsgálandó vegyületeket ip. vagy iv. adjuk be időszakos kezelési rend szerint, azaz az 1., 5., 9., 13. és 17. napon naponta egyszer. A tumorokat a beültetés után 3 héttel megmérjük. A vegyületek aktivitását a tumor növekedésének gátlásán mérjük le. Pozitív kontrollként cispialint alkalmazunk, amely az emlő adenokarcinoma 16/c növekedését általában teljesen gátolja. A 2:75% tumor-növekedés gátlás azt jelzi, hogy a vegyüld az ilyen típusú állati tumor modellen aktív. A vizsgálat eredményeit az 5. táblázatban ismertetjük. A 2. táblázat 1. számú vegyületének hatását in vivo ADJ-PC6 Plasmacytoma tumor modellen is vizsgáltuk. Ebben a vizsgálatban a tumorsejtckel BALB/c nőstény egerekbe sorozatosan szubkután passzáljuk, majd a 21. napon aszeptikusán gyűjtjük és Hank kiegyensúlyozott sóoldatban aprítjuk. Ezután a sejteket lazán illesztett teflon-üveg homogenizátorban homogenizáljuk, majd a scjlkonccntrációt 4x 10® élő - sejt/ml értékre (trypankék-kizárás) állítjuk be hemocitometeres számlálás segítségével. 8 főből álló BALB/c nőstény egércsoport egereinek jobb csípőjébe szubkután 0,5 ml, 2 x 106 sejtet ültetünk be. A vizsgálandó anyaggal az 1.-10. napon ip. vagy az 1-5. napon iv. kezeljük az állatokat. A 18. napon a tumor függőleges átmérőjét íinombeállítású tapintókörzővel mérjük meg. A tuinortérfogatot a hosszúság x szélesség2 x 0,5 szorzatból számítjuk. Általában a tumor növekedés 2:75%-os gátlását tekintjük szignifikáns tumorgátló hatásnak. A pozitív kontrollként alkalmazott cisplatin a tumor növekedését teljesen gátolja. Eredményeinket a 6. táblázatban ismertetjük. A 2. táblázat 1. számú vegyületét egy másik in vivo modellen, a szubkután M5076 retikulumsejt szarkomán egérben is megvizsgáltuk a következő módon: B6D2F, nőstény egereket csípőjükön szubkután megfertőzünk 0,5 ml 10 t/térf% M5076 tenyészettel, amelyet C57B,/6 donorok körülbelül a 21. napon kimetszett cs összegyűjtött szubkután tumorából készítünk. A kezelést a tumor beültetését követően 1 nappal kezdjük és naponta, 10 napon át végezzük. A tumort a beültetést követő 21. napon megmérjük, a tumor-gátló hatást a tumor növekedésének gátlásával mérjük. Általában a >75%-os tumornövekedésgátló hatást tekintjük szignifikáns tumorgátló hatásnak. A pozitív kontrollként alkalmazott cisplatin teljes tumorgátló hatást fejt ki. Eredményeinket a 7. táblázatban ismertetjük. A találmány szerint előállított gyógyászati készítmények hatásos mennyiségű tumorsejt növekedést gátló (1) általános képletü vegyületet és közömbös, gyógyászati célra alkalmas hordozó és/vagy segédanyagokat tartalmaznak. A készítményeket parenterális adagolásra alkalmas egységdózissá formáljuk. A találmány szerint előállitott, parenterális adagolásra alkalmas készítmények lehetnek steril vizes vagy nemvizes oldatok, szuszpenziók vagy emulziók. A készítményekben az aktív anyagot minimális térfogatú dimetil-acetamidban vagy etanolban például 5 térf%ra oldjuk, majd mogyoróolajjal vagy normál sóoldatlal egészítjük ki a kívánt térfogatra. A hatóanyag oldására használhatunk polietoxilált ricinusolajat is például 2-5 térfogat% koncentrációban. Ezen kívül a készítmény szuszpenzió formájú is lehet, például hidroxi-propil-ccliulózí vagy más szuszpendáió anyagot is tartalmazhat. Emulgeálószerként például lecitint alkalmazhatunk. A készítményeket steril szilárd anyagok formájában is elkészíthetjük és közvetlenül használat előtt oldjuk steril injekciós közegben. Az (I) általános képletü vegyületeknek a készítményekben alkalmazott aktuális előnyös dózisa az alkalmazott komplextől, az adott készítménytől, az adagolás módjától, a kezelés helyétől, a kezelt egyedtöl (fajtól) és betegségtől függően változó. A belsőleges adagolás módját úgy választjuk meg, hogy a fémkomplex a tumorral hatásos tumor-növekedést gátló mennyiségben kerüljön érintkezésbe. Az optimális dózis szakember a szokásos dózisincgváiaszló vizsgálatokkal, az előzőekben ismertetett kísérleti adatok ismeretében meg tudja választani. Parenterális adagog 10 13 20 25 20 25 40 45 50 55 60 65 6
