196788. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált dihidro-piridin származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 nek a szívizomerő/pulzusszám szempontjából szelektív szív-stimuláló hatásuk van és emellett alig okoznak arritmiát. Értágító hatás A bemutatott vegyiileteket autoperfúziósan átáramoltatott macskák hátsó végtagjain (állandó sebességű-véráramlással végzett autoperfúzió) vizsgáljuk. Az ED|S-érték az az intravénásán adagolt mennyiség, amely a hátsó negyed perfúziós nyomását (értágítás) 15%-kal csökkenti. A vegyület példaszáma EDt s (/im/kg) 1 0,05 2 0,38 3 0,64 5 0,24 7 0,15 8 0,04 A hörgőtágító hatás in vivo vizsgálata Hím Dunkin-Hartley törzsbe tartozó tengerimalacokat (testtömegük 530 g±6 g) Sagatallal (pentobarbital-nátrium) (90 mgjkg i.p.) altatjuk. A légúti ellenállást a klasszikus Konzett-Rossler módszer egyik módosítása szerint mérjük (Versuchsanordnung zu Untersuchungen an der Bronchialmuskulatur, Naunyn-Schmiedebergs Arch. Exp. Path. Pharmak. 195, 71-74, /4 940/). Olyan mennyiségű hisztamint adagolunk intravénásán, amely a légúti ellenállást mintegy 150%-kal növeli. Az 1. példa szerinti vegyületet a hisztamin által kiváltott légcsőösszehúzódást csökkenti. A vegyület küszöbdózisa lxlO'8 mól/kg. Az 1. példa szerinti vegyületnek az a menynyisége, amely a hisztamin által okozott hörgőösszehúzódást 50%-kal csökkenti (ED50-érték) l,8xl0'6 mól/kg, ez mutatja az in vivo hörgő tágító hatást. A vérlemezke-aggregáció gátlása in vitro •vizsgálatban Alvadás ellen 1/10 térfogatú sav-citrát-dextrózzal kezelt teljes humán vérből vérlemezkében gazdag plazmát (PRP) készítünk. A citrátos vért 5 percig 700 g-vel centrifugáljuk, majd a PRP-t eltávolítjuk. A visszamaradó vörösvérsejteket és a plazmát további 15 percig centrifugáljuk 900 g-vel és a vérlemezkében szegény plazmát eltávolítjuk. Ezt azután PRP- vel keverjük úgy, hogy a végső vérlemezke-szám 2-3 x 10® sejt/ml legyen. A PRP-t 0,5 ml-es aliquot részekre osztjuk és ezeket 37 °C hőmérsékleten 2 percig előinkubáljuk, majd Teckman kiíróberendezéssel összekapcsolt HG aggregométer vizsgálati kamrájába helyezzük. Ezután 100 mmól mennyiségben aszpirint adagolunk. Vizsgáljuk az 1. példa szerinti vegyület nélkül, illetve különböző koncentrációinak jelenlétében az endoperoxidot szimuláló U44069 vegyület (9,11- -epoxi-metano-PGHj) hatására végbemenő aggregációt. A?. 1. példa szerinti vegyület az endoperoxidot szimuláló U44069 vegyület (10 /rmól) által indukált aggregációt aszpirinnel kezelt, vérlemezkében gazdag plazmában csökkenti, IC50-értéke 0,08±0,01 j/mól. 1. leírás (+)- és (->6-(4-Amino-fenil)-5-metil-4,5- -dihidro-3(2H)-piridazinon előállítása Racém 6-(4-amino-fenil)-5-metil-4,5-dihidro-3(2H)-piridazinont (2,0 g) feloldunk acetonitril (80 ml) és diklór-metán (30 ml) elegyében, majd Jobin-Ycon közegü nyomás alatti folyadékkromatográfiás rendszerben lévő, 1104 kPa-nál átmosott /diklór-metánnal való iszaposítással (1,5 liter)/, 40 fim méretű 7-amino-propil szilanizált szilikagélen (2,1 kg) ionosán kötött (R)-N-(3,5-dinitro-benzoil-fenil)-glicin oszlopra viszünk. Az oszlopot diklór-/ntetanol (199:1) elegyével mossuk 9 órán át 80 ml . min'1 sebességgel. A frakciókat 280 nm-nél ultraibolya-fénnyel határozzuk meg. Széles csúcsot kapunk, amelyből a frakciókat összegyűjtjük. A korábban kapott frakciók a (-)-enantiomerben gazdagok. Ezeket a frakciókat egyesítjük és az előbb említett oszlopon az említett eluenssel ismét kromatografáljuk. Az elválasztott frakciókat bepároljuk, dietil-éterrel trituráljuk, szűrjük és a kapott szilárd anyagot dietil-éterrel mossuk és 80 °C hőmérsékleten 18 órán át szárítjuk. így a (-)-6-(4-amino-fenil)-5-metil-4,5-dihidro-3(2H)-piridazinont kapjuk, op.: 203-204 °C, [a]jj - -399 D (koncentráció 0,74% etanol/víz/tömény sósavoldat /17:2:1 / elegyében). A (->izomer egy részét 3-bróm-propionil-kloriddal reagáltatjuk és így csak enantiomert tartalmazó tiszta (-)-6-[4-(3-bróm-propionantido)-fcnil]-5-metil-4,5-dihidro-3(2H)-piridazinont kapunk, amelynek az abszolút konfigurációját röntgen diffrakcióval határozzuk meg, ami (R). Az első oszlopról később kapott frakciók (+)-enantiomerben gazdagok (mintegy 75%), és ezeket a frakciókat közepes nyomású folyadékkromatografálásnak (Jodin-Yvon-rendszer) vetjük alá 25—40'Mrii, méretű 7-amíno-propil-szilanizált szilikagélen (55 g) ionosán kötött .(S)-N-(3,5-dinitro-benzoil)-fenü-glicin oszlopon eluálószerként diklór-metán/metanol (199:1) elegyét alkalmazva. A megfelelő frakciókat egyesítjük az előző feldolgozásokból származó frakciókkal és ezeket együtt ismét kromatografáljuk a megadott oszlopon. A kapott frakciókat bepároljuk, dietil-éterrel trituráljuk, szűrjük és a kapott szilárd anyagot dietil-éterrel mossuk és 80 °C hőmérsékleten 18 órán át szárítjuk. így a (+)-6-(4-amino-fenil)-5-metil-4,5-dihidro-3(2H)-piridazinont kapjuk, op.: 206—208 °C, [<*$=♦376°. (koncentráció = 0,74% etanol/víz/tömény sósav-oldat /17:2:1/elegyében. 1. példa 5-Metil-6-[4-(4-oxo-l,4-dihidropiridin-l-il)--fenil]-4,5-dihidro-3(2H)-piridazinon előállítása 6-(4-anűno-fenil)-5-metil-4,5-dihidro-3(2H)-piridazinon (1,0 g), 4H-pirán-4-on (0,52 g), víz (20 ml) és 196.788 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
