196627. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 9 alfa-hidroxi-4-androsztén-3,17-dion mikrobiológiai előállítására
9 196 627 10 A sejtekről leoldott szterin-lebontási termékeket és a mcgsavanyított szürletből extrakcióval kinyert nyers terméket egyesítjük és 250 g kovasavból készített oszlopon fokozatosan növekvő etil-aeetát tartalmú n-heptán-etil-acetát elegyekkel kroijiatografál- 5 juk. 25 % etil-acetát tartalmú n-heptjn-etil-acetát eleggyel az átalakulatlanul maradt kiindulási anyag oldódik le az oszlopról. A kromatográfiás frakciókat bepárolva l,5 g (3-szitoszlcrin-kampcszterin keveréket kapunk. A 40 % etil-acetát tartalmú n-heptán-etil-ace- 10 tát eleggyel leoldódó frakciókat bepárolva, majd a bepárlási maradékot acetonbó! átkristályosítva 0,3 g 9a-hidroxi-3-oxo-23, 24-dinor4-kolén-22-sav-metilészterhez jutunk. Op.: 212—216 °C. A 45 % etil-acetát tartalmú n-hcptán-ctil-acctát 15 eleggyel Jcoldódó frakciókat betárolva, majd a bepárlási maradékot acetonból kristályosítva 0,1 g 9a-hidroxi-3 -oxo-23,24-dinor-4,l 7(20)-koladién-22-aIdehidet kapunk. Op.: 204-209 °C. Az 55 % etil-acetát tartalmú n-hcptán-etil-acetát 20 eleggyel leoldódó frakciókat vákuumban bepárolva, majd a bepárlási maradékot metanolból átkrislályosítva 5,7 g 9a-hidroxi-4-androsztén-3,17-diont nyerünk. Op.: 219-221 °C. [a]D = +180° (c = l,kloroform). 25 A 70 % etil-acetát tartalmú n-hcptán-etil-acetát eleggyel leoldódó frakciókat vákuumban bepároljuk. A kapott 9a-hidtoxi-3-oxo-23, 24-dinor4-kolén-22- sav és a 9a-hidroxi-3-oxo-23,24-dinor4,17(20)-koladién-22-sav keveréket tartalmazó bepárlási maradékot egyesítjük a fermentléből savanyítással leválasztott savkeverékkel, majd metanolból kétszer átkristályosítjuk. így 0,4 g kromatográfiásan tiszta 9a-hidroxi-3- oxo-23,24-dinor4,l 7(20)-koladién-22-savat kapunk. __ Op.: 242-248 °C. A kristályosítási anyalúgban levő 9a-hidroxi-3-oxo-23.24- dinor4-kolén-22-sav és a 9a-hidroxi-3-oxo-23,- 24-dinor4,l7(20)-koladiéu-22-sav keveréket preparatív vékonyrétegkromatográfiás módszerrel (adszorbens: Kieselgel G /Reanal, Budapest/ és lüeselgel 60 HF„436ä /Reanal, Budapest/ 2:1 keverék; kifejlesztő oldószerelegy: bcuzol-aceton II: if) tisztítjuk, így 0,1 g kromatográfiásan tiszta 9«-hidroxi-3-oxo-23.24- dinor4-kolén-22-savhoz (op. 258—262 °C) és 0,2 g 9a-hidroxi-3-oxo-23,24-dinor4,17(20)-koladién-22-savhoz jutunk. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás 9or-hidroxi4-nndrosztén-3,17-dion előállítására növényi vagy állati eredetű természetes szterinekből vagy azok keverékéből enzimhiányos, szteroidbontó mikroorganizmus törzs süllyesztett tenyészetével, asszimilálható szén- és nitrogénforrásokat, valamint ásványi sókat tartalmazó táptalajon végzett aerob fermentációval, s a képződött termék elkülönítése útján, azzal jellemezve, hogy az átalakítandó szterint vagy szterin keveréket, az új Mycobacterium roseum faj törzsének tenyészetével, előnyösen az Országos Közegészségügyi Intézetné! a Mikroorganizmusok Nemzeti Gyűjteményében MNG 00339 számon letétbe helyezett Mycobacterium roseum sp. nov. 1108/1 jelű törzs tenyészetével fermentáljuk, s a kapott 9a-hidroxi4-androsztén-3,17-diont kívánt esetben elkülönítjük és a fermentléből tisztítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy természetes eredetű szterinként 0-szitoszterin és kamposzterin 2:1 arányú keverékét alkalmazzuk. Ábra nélkül Kiadja íiz Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel: I timer Zoltán osztályvezető Megjelent: a Műszaki Könyvkiadó gondozásában COPYLUX Nyomdaipari és Sokszorosító Kisszövetkezet
