196461. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immun interferon előállítására és tisztítására, valamint ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
lb 196461 17 4. táblázat Minta Hígítás Maradék IFN aktivitás (E/mi) ■#2-11.1 frakció 17 ío-1 1100 10-2 1100 ío-3 2200 10-« 2200 Anti-IgE monoklonális antitest 10-2 2200 10-2 2200 ío-3 2200 10-* 2200 9. példa 20 Al-osztály, amelyhez a monoklonális antitestek tartoznak Tisztított antitest frakciót (17 jelű) (8. példa) 10-szeresére hígítunk és agaron immuno-kicsapásos reakciónak vetjük aló (Ouchterlony teszt: Immunological Methods, Gel-Diffusion Techniques, Blackwell Oxford, 1964) kecske anti-egér IgGl, G2a, G2b és G3 antitesteket (Miles) alkalmazva úgy, hogy olyan IgG al-osztóly legyen azonosítható, amelyhez #2-11.1 monoklonális antitestek tartozhatnak. A monoklonális antitest és a kecske anti-egér IgG2b antitest között egyetlen különálló sáv található, míg a monoklonális antitest és a többi anti-antitest között nem figyelhető meg sávképzödés. Ennek megfelelően a monoklonális antitest az IgG2b-hez tartozik (5. táblázat). 5. táblázat Monoklonikus antitest al-osztály Antigén Antitest Kicsapásos görbe Találmányunk szerinti monoklonális antitest (Frakció 17) Anti-IgGl Anti-IgG2a Anti-IgG2b + Anti-IgG3 10. példa A 8. példa szerinti eljárással tisztított kifolyó frakciókból 25 ml (65,3 mg) monoklonális antitestet egy éjjelen át 0,1 mólos nátrium-hidrogén-kar bonét tál szemben (pH = 8,3) dializálunk. Külön lombikban 25 ml AFFI-GEL 10-t (Bio-Rád) vízzel alaposan mosunk, üvegszűrő felhasználásával, 0,1 mólos nátrium-hidrogén-karbonát-oldatban szuszpendálva (pH = 8,3) és a fenti antitesttel összekeverjük. Az elegyet 4 órán át 4 °C-on a reakció lejótszatása céljából enyhén keverjük, majd 4 °C-on egy éjjelen át állni hagyjuk. Az AFFI-GEL 10-t 0,1 mólos nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal (pH = 8,3) üvegszűrő alkalmazásával alaposan mossuk. A gélhez 25 ml, 0,1 mól etanol-amint és 0,15 mól nátrium-kloridot tartalmazó oldatot (pH = 8,0) adunk. Az elegyet 4 °C-on egy órán át rázatjuk a még visszamaradó reagálatlan aktiv csoportok blokkolása céljából. A gélt ezután PBS-el alaposan mossuk és 25 ml, 0,1% nátrium-azidot tartalmazó PBS-ben (foszfáttal pufferolt nátrium-klorid-oldat; 0,01 mól/liter foszfát, nátrium-kloridban, 8,5 g/1, pH = 7,0) szuszpendáljuk. A szuszpenziót 4 °C-on tároljuk. A hozzáadott antitest és a szürletben levő antitest mennyisége alapján azt találtuk, hogy az antitest 2,35 mg/ml gél arányban kötődik a gélhez. Antitest oszlopként az ily módon kapott reakciótermékkel töltött oszlopot alkalmazunk. 10
