196459. lajstromszámú szabadalom • Eljárás neomycin előállítására
8 Neoraicin Mg/ml 196459 9 A fermentáció kora óra 96 10.400 120 15.200 144 20.500 168 22.900 A fermentáció befejezésekor a hatóanyagtartalom 22.900 Mg/ml volt. A fermentlé szürletéból Levatit típusú ioncserélő gyanta alkalmazásával a 169.452 sz. magyar szabadalmi leírás szerinti eljárással egy literre vonatkoztatva 14,8 g tiszta neomicin-szulfát hatóanyagot nyerünk ki. A íermentléből nyert hatóanyag jellemzői: Kémiai hatóanyagtartalom: 99,1% Biológiai NE/mg: 682 Specifikus forgatóképesség: [cC]20d = +55,1 {c = 2, vízben) 2. példa Az 1. példában leírtak szerint spóratenyészetet és inokulum fermentációt készítettünk. Az inokulum fermentációból a főfermentációs táptalaj térfogatára számolt 10%-nyi mennyiséget oltottunk ét a föfermentácíós táptalajba. A táptalaj összetétele: Kukorica-finomliszt (keményitőtartalma: 80%) 7.0% Szöjaliszt 3.3% Glükóz 1.5% CaCOj 0.25% Pómaolaj 0.1% pH a sterilezés előtt: 6,9 Sterilezés 125 °C-on 45'-ig pH a sterilezés után: 6,8 A beoltott főfermentációt 260 fordulat/perc sebességgel mozgó 3,2-3,4 cm kitérésű sikszita-elven működő rázóasztalon 500 ml-es Erlenmayer tenyésztő lombikokban, lombikonként 130 ml fermentlével 32 °C-on 5% oldott oxigénszint mellett, 160 óráig tenyésztettük. A neomícin-képződése a következő volt A fermentáció kora Neomicin (óra) (og/ml) 96 96 3.500 120 6.000 144 9.300 160 12.100 A fermentlé egy literére vonatkoztatva 6,8 g neomícin-szulfátot nyertünk ki, amelynek kémiai hatóanyagtartalma: 90,0% biológiai hatóanyagtartalma (NE/mg): 680 3. példa Az 1. példában leírtak szerint elkészített inokulum fermentációból a főfermentációs táptalaj térfogatéra számolt 10%-nyi mennyiséget oltottunk át a föfermentációs táptalajba, melynek összetétele a következő volt: Kukorica-finomliszt (keményitőtartalma: 80%) 9.0% Szójaliszt 5.6%. Glükóz 2.0% CaCOa 0.25% Pálmaolaj 0.1% pH a sterilezés előtt: 6,8 Sterilezés 125 °C-on 45'-ig pH a sterilezés után 6,7-6,9 A beoltott föfermentációt 240-260 fordulat/perc sebességgel mozgó 3,2-3,4 cm kitérésű sikszita-elven működő rázóasztalon 500 ml-es Erlenmayer tenyésztő lombikokban, lombikonként 35 ml fermentlével 32 °C-on, 100% oldott oxigénszint mellett tenyésztjük. A neomicin-képzódése a következő volt: A fermentáció kora Neomicin (óra) (pg/ml) 96 11.900 120 15.300 144 19.700 160 22.500 A fermentlé egy literére vonatkoztatva 14,5 g neomicin-szulfátot nyertünk ki, amelynek kémiai hatóan yagtartalma: 99,2% biológiai hatóanyagtartalma (NE/mg): 680 4. példa Az 1. példában leírtak szerint elkészített inokulum fermentációból a föfermentációs táptalaj térfogatára számolt 10%-nyi mennyiséget oltottunk át a föfermentációs táptalajba, melynek összetétele a következő volt: Kukorica-finomliszt (keményitőtartalma: 80%): 7.5% Szójaliszt 6.0% Glükóz 2.0% CaC03 0.25% Pálmaolaj 0.1% A táptalaj keményítőtartalmát előzetesen bakteriális -amilázzal folyósítottuk. A folyósításhoz az enzimsűritményből 0,02 ml/100 g keményítőmennyiséget használtunk. A folyósítást 75 °C-on, 20'-ig végeztük. Az enzim-működést ezután 90 °C-ra való felmelegítéssel leállítottunk. pH a sterilezés előtt: 7,0 Sterilezés 125 °C-on 45’-ig pH a sterilezés után 6,7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
