196457. lajstromszámú szabadalom • Eljárás interferonok előállítására
38 196457 39 A találmány szerinti polipeptideket önmagában ismert módon gyógyszerkészítményekké alakíthatjuk. Ekkor a polipeplidet gyógyászatiig elfogadható vivőanyaggal/anyagokkal keverjük össze. Az alkalmas vivöanyagokat és gyógyszerformákat például a Remington’s Pharmaceutical Sciences kézikönyv (szerkesztő E. W. Martin) ismerteti. A gyógyszerkészítmények a találmány szerinti interferon fehérje hatékony mennyiségét tartalmazzák, megfelelő mennyiségű vivőanyaggal együtt. Előnyös a parenterálisan beadható gyógyszerkészítmény. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás a 4. ábra szerinti LelF' A 1- 166 aminosav-szekvenciáját tartalmazó érett LelF A polipeptidet kifejezni képes LelF A trp típusú plazmidok előállítására, azzal jellemezve, hogy indukált emberi fehérvéi’sejt mRNS-böl vagy sejtvonal mRNS-ből, előnyösen a KG-1 sejtvonal (ATCC CRL 8031) mRNS-éból származó cDNS-t tartalmazó baktériumtelep-bankokat állítunk elő, az interferon aktivitás kiváltására képesnek mutatkozó telepekből a plazmid DNS-eket elkülönítjük és ezeket szintetikus DNS vizsgáló mintáknak egy indukált mRNS-böl származó cDNS-sel történő hibridizálása és a hibridizált szintetikus DNS vizsgáló minták reverz transzkripcióval történő hosszabbítása útján kapott, rádióaktiv jelzésű cDNS vizsgáló mintákhoz hibridizáljuk, a legerősebben hibridizáló és a teljes lánchosszúságú LelF A gént tartalmazó kiónokat kiválasztjuk, az említett hibridizáló kiónok teljes LelF A génjét szintetikus dezoxioligoriukleotidok alkalmazásával módosítjuk az érett LelF A mikrobiális kifejezését esetleg gátló vezető szekvenciák kiküszöbölése végett, és a kapott terméket egy trp promotort, operátort és trp vezető riboszóma kötési helyet tartalmazó plazmidba iktatjuk oly módon, hogy a módosított LelF A gén operativen kapcsolódjék az említett trp szabályozó rendszerrel. (Elsőbbsége: 1980. 07. 01.) 2. Eljárás a 4. ábra szerinti LelF B, C, D vagy F 1-166 aminosav-szekvenciáját tartalmazó érett LelF B, LelF C, LelF D vagy LelF F kifejezésére képes LelF B trp, LelF C trp, LelF D trp vagy LelF F trp típusú plazmidok előállítására, azzal jellemezve, hogy interferon-aktivitás kiváltására képesnek mutatkozó telepekből származó plazmid DNS- eket az 1. igénypont szerint kapott teljes lánchosszúságú LelF A génből származó, rádióaktív jelzésű DNS-sel hibridizálunk, a hibridizációt mutató és a teljes lánchosszúságú LelF B, LelF C, LelF D vagy LelF F gént tartalmazó kiónokat kiválasztjuk, az említett hibridizáló kiónok teljes lánchosszúságú interferon génjeit resztrikciós enzimmel hasítjuk az érett LeIF-el mikrobiális kifejezését esetleg gátló vezető szekvenciák kiküszöbölésére, majd egy trp promoter, operátor és trp vezető riboszóma kötési helyet tartalmazó plazmidokba iktatjuk be oly módon, hogy a resztrikciós enzimmel kezelt interferon gének operativen kapcsolódjanak az említett trp szabályozó rendszerrel. (Elsőbbsége: 1980. 09. 08.) 3. Eljárás a 4. ábra szerinti LelF H 1- 166 aminosav-szekvenciáját tartalmazó érett LelF H kifejezésére képes LelF H trp típusú plazmidok előállítására, azzal jellemezve, hogy interferon-aktivitás kiváltására képesnek mutatkozó telepekből származó plazmid DNS-t az 1. igénypont szerint kapott teljes lánchosszúságú LelF A génből származó, rádióaktiv jelzésű DNS-sel hibridizálunk, a hibridizációt mutató és a teljes lánchosszúságú LelF H gént tartalmazó kiónokat kiválasztjuk, az említett hibridizáló kiónok teljes lánchoszszúságú interferon génjeit resztrikciós enzimmel hasítjuk az érett LelF H mikrobiális kifejezését esetleg gátló vezető szekvenciák kiküszöbölésére, majd egy trp promotort, operátort és trp vezető riboszóma kötési helyet tartalmazó plazmidokba iktatjuk be oly módon, hogy a resztrikciós enzimmel kezelt interferon gén operativen kapcsolódjék az említett trp szabályozó rendszerrel. (Elsőbbsége: 1980. 11. 10.) 4. Eljárás a 9. ábra szerinti LelF I vagy J 1-166 aminosav-szekvenciáját tartalmazó érett LelF I vagy LelF J kifejezésére képes LelF I trp LelF J trp típusú plazmidok előállításéba, azzal jellemezve, hogy az emberi genom A-fág Charon 4A rekombinárs könyvtárát az 1. igénypont szerint kapott teljes lánchosszúságú LelF A génből származó, rádióaktív jelzésű DNS-sel hibridizáljuk, a hibridizációt mutató és a teljes lánchosszúságú LelF I vagy LelF J géneket tartalmazó kiónokat kiválasztjuk, az említett hibridizáló kiónok interferon génjeit resztrikciós enzimmel hasítjuk az érett LeIF-ek mikrobiális kifejezését esetleg gátló vezető szekvenciák kiküszöbölése végett, majd egy trp promotort, operátort és trp vezető riboszóma kötési helyet tartalmazó plazmidokba iktatjuk be oly módon, hogy a resztrikciós enzimmel kezelt interferon gének operatíven kapcsolódjanak az említett trp szabályozó rendszerrel. (Elsőbbsége: 1981. 04. 21.) 5. Eljárás a 4. ábra szerinti LelF A 1- 166 aminosav-szekvenciáját tartalmazó érett LelF A kifejezésére képes Escherichia coli transzformánsok előállítására, azzal jellemezve, hogy egy az 1. igénypont szerint előállított plazmidot alkalmazunk egy Escherichia coli törzs transzformálására. (Elsőbbsége: 1980. 07. 01.) 6. Eljárás a 4, ábra szerinti LelF B, C, D vagy F 1-166 aminosav-szekvenciáját tartalmazó érett LelF B, LelF C, LelF D vagy Leli'’ F kifejezésére képes Escherichia coli transzformánsok előállítására, azzal jelle21 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
