196455. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyhatású peptideket adó transzformánsok előállítására
18 196455 19 fürdőben élénk keverés mellett 256 g benzil-bromidot adunk az oldathoz, majd tovább keverjük öt órán ét hideg szobában. Ezután az oldat pH-ját 5-re állítjuk be ecetsavval, amikoris csapadék képződik. A csapadékot, szűréssel kinyerjük és vízzel mossuk. Ilyen módon 160 g S-Bzl-ciszteint nyerünk, amely 212 °C-on olvad. A kitermelés 70%. A fentivel leirt módszerrel azonos módon 150 g O-Bzl-aszparaginsavat nyerünk 160 g aszparaginsavból és 150 g O-Bzl-glutaminsavat nyerünk 160 g glutaminsavból. G. Boc-aminosav 29 g L-valint feloldunk 250 ml 1 n vizes nétrium-hidroxid oldatban, és az oldathoz annyi vizet adunk, hogy az oldat térfogata 400 ml legyen. Az oldathoz 150 ml tetrahidrofurént adunk. 10 °C hőmérsékleten, élénk keverés mellett az oldathoz 100 ml Boc-kloridot adunk 5 részletben 10 perces időközönként miközben 2 n vizes nátrium-hidroxid oldatot is adunk minden egyes Boc-klorid adagolás után olyan mennyiségben, hogy a pH érték 8 és 9 közé essék. Két óra múlva a keveréket dietil-éterrel extraháljuk. A vizes fázist 0,5 mólos vizes citromsav oldattal megsavanyitjuk, ezáltal olajos anyag csapódik ki. A csapadékot etil-acetáttal extraháljuk. Az extraktumot kis mennyiségű vízzel mossuk, nátrium-szulfáttal szárítjuk, és csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrált extraktumot petroléterhez adjuk és a keveréket hűtőben hagyjuk állni, igy kristályok képződnek. A kristályokat kiszűrjük és szárítjuk. 30 g Boc-valint kapunk, amelynek olvadáspontja 78 °C. Kitermelés 55%. H. Más Boc-aminosavak A fenti művelethez hasonló módon 15 g Boc-glicint, 16 g Boc-alanint, 15 g Boc-leucint, 15 g Boc-izoleucint, 14 g Boc-szerin(Bzl)-t, 14 g Boc-treonin(Bzl)-t, 15 g Boc-cisztein(Bzl)-t, 15 g Boc-metionint, 12 g Boc-prolint, 15 g Boc-aszparaginsav(OBzl)-t, 15 g Boc-glutaminsav(OBzl)-t, 15 g Boc-glutamint, 12 g Boc-hisztidin(Bzl)-t, 13 g Boc-lizin(Z)-t, 15 g Boc-arginin(N02)-t, 15 g Boc-fenilalanint, 15 g Boc-tirozin(Bzl)-t és 10 g Boc-triptofánt készítünk 30 g izoleucinból ill. 30 g alaninból ill. 30 g leucinból ill. 30 g izoleucinból ill. 30 g szerin(Bzl)-ból, ill. 30 g treonin(Bzl)-ből, illetve 30 g cisztein(Bzl)-ből ill. 30 g metioninból ill. 30 g prolinból ill. 30 g aszparaginsav(OBzl)-ból, ill. 30 g glutaminsav(OBzl)-ből ill. 30 g glutaminból ill. 30 g hisztidin(Bzl)-böl ill. 30 g lizin(Z)-ből ill. 30 g arginin(N02)-ből ill. 30 g fenilalaninból ill. 30 g tirozin(Bzl)-ból, ill. 30 g triptofánból. 4. lépés. A Boc-glutamin kapcsolása a gyantához 2 g klórmetil-gyantát (teljes Cl-tartalom 4 mmól), 2 mmól Boc-L-glutamint, 1,8 mmól trietil-amint és 12 ml dimetil-formamidot keverünk szobahőmérsékleten 24 órán át. A keveréket üvegszűrőn leszűrjük és a szilárd terméket egymás után 700-700 ml dimetilformamiddal, etanollal, ecetsav/etanol keverékkel és metilén-kloriddal mossuk. A terméket szobahőmérsékleten, csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. Az aminosav-tartalom meghatározása érdekében 50 mg-ot bemérünk a termékből, 1 : 1 térfogat arányú 12 n vizes sósavoldat/dioxán elegyében 24 órán át hidrolizáljuk és aminosav-analizátorban vizsgáljuk. Az aminosav-tartalom 0,2 mmól/g. 5. lépés. Boc-Ser-Gln-gyanta 2 g Boc-Gln gyantát, amelyet a 4. lépés szerint nyertünk, 160 ml ecetsavba teszünk, és 6 óra hosszat állni hagyjuk szobahőmérsékleten. A keveréket üvegszűrőn szűrjük. A szűrőpogácsát 160 ml ecetsavba helyezzük, összekeverjük, majd újra szűrjük. Ezt a műveletet háromszor ismételjük. Végül a szűrőpogácsát 160 ml 1 n vizes sósavoldat/ecetsav elegyében fél óra hosszat keverjük a Boc csoport eltávolítása érdekében a gyantából. A kapott terméket kiszűrjük, egymás után három rész ecetsavval, etanollal és dimetil-formamiddal mossuk, végül 160 ml 10 súly% trietilamint tartalmazó dimetil-formamiddal keverjük össze a semlegesítési reakció végrehajtására. A kapott terméket kiszűrjük és egymás után dimetil-formamiddal és metilén-kloriddal mossuk. A terméket 12 ml, 2 mmól Boc-szerin(Bzl)-t tartalmazó metilén-kloridba helyezzük és keverjük. Tíz perc múlva 60 ml, 20 mmól diciklohexil-karbodiimidet tartalmazó oldatot adunk a keverékhez és keverjük további két órán át, így végezve el a kapcsolási reakciót. A kapott terméket kiszűrjük és egymás után metilén-kloriddal és etanollal mossuk. 6. lépés. Boc-peptidil gyanta Egymás után végezve az 5. lépés szerinti műveleteket az aminosav-lánc hosszabbítása érdekében, a következő Boc-peptidil gyantákat nyerjük: Boc - HC+ (O)-gyanta, Boc - HCT^ (-121, -126, -127, -133, -136, -150, -151) - gyanta, Boc - HCT (-121, -126, -127, -133, -136) - gyanta, Boc - HCT (-150, -151) - gyanta, Boc - HC4 (+121, +126, +127, +133, +136, +150, + 151) - gyanta, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 11
