196354. lajstromszámú szabadalom • Eljárás protozoa-ellenes hatású vegyületek és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
15 196 354 16 2-(Helyettesített-áklohcxil)-3-hidroxi-naftokinonszármazékok aktivitása Eimeria törzsekkel szentben (a) ln vitro aktivitás Eimeria tenellával szentben Meghatároztuk a 8. példában vizsgált vegyülctck Eimeria tenellával szembeni aktivitását. Az alkalmazott módszernél a sejttenyészeteket megfertőztük az Eimeria tenella sporozoitszuszpenzióival közvetlenül a vizsgált vegyületek hozzáadása után. A vizsgált vegyü letek oldatainak sorozathígítását a 8. példában leírt módon végeztük el a 19 pig/liter és a 20 mg/liter közötti tartományban a minimális gátló koncentráció (MIC) meghatározásához. 96 órás inkubálás után a tenyészetek növekedését megállítottuk, és a sejteket megfestettük 0,1 %-os toluidinkék színezékkel. A megfestett tenyészetekben mikroszkóppal vizsgáltuk a paraziták jelenlétét. A kapott eredményeket a 2. táblázatban mutatjuk be. tO. pc Uta 2. táblázat Ra MIC (M) 4'-ciklohexil- (100 % transz-izomer) 9,2 xlO-8 4'-metil- (100 % transz-izomer) 4,6 xlCT7 3'-tercier-butil- (80 % transz-izomer) 4,0 x 10-6 4'-tercier-butil- (80 % transz-izomer) 1,0xlO-8 4'-tercier-butil-(100 % transz-izomer) 2,5-4,0xl0~9 4'-tercier-butil- (100 % cisz-izomer) 2,5 x 10~® 4'-tcrcícr-pcntil- (50) % transz-izomer) 9,6 x KP9 4'-tercier-pentil- (60 % transz-izomer) 9,6 x 10~s 4'-tercier-pentil- (50 % transz-izomer) 9,6 x KP9 (b) In vivo aktivitás Eimeria tcncllávaf és Eimeria acervulinával szemben A 9. jrélda (a) pontjában vizsgált vegyületeket in vivo szűrővizsgálatnak is alávetettük. A vegyületeket különböző dózisokban kevertük a baromfitáphoz és 6 napig etettük velük az 5-5 hím Ross Ranger hétnapos csirkékből álló csoportokat. A kezelés után egy nappal valamennyi állatot megfertőztük Eimeria tenellával és Eimeria acervulinával. A megfertőzéstől számított ötödik napon feljegyeztük az Eimeria tenella bántalmaktól megszabadult állatok számát, valamint az Eimeria acervulina oociszták jelenlétét vagy távollétét az ürülékben. A kapott eredményeket a 3. táblázatban tüntettük fel, ahol a számok az Eimeria tenellától megszabadult állatok számát jelentik, a betűk pedig az Eimeria acervulina jelenlétére vagy távollétére utalnak (A = nincs; P = jelen van; M = 95 %-os megszabadulás a fertőzéstől a vegyületekkel nem kezelt kontroll csoporthoz képest). 3. táblázat T ra 50 Dózis (ppm) 100 200 4' ciklohexil(100 % transz) 1/5 (P) 5/5 (P) 5/5 (A) 4’ tcrcíer-butil'80 % transz) 0/5 (P) 5/5 (A) nem 4'-tercier-pentiI(60 % transz) 4/5 (M) 5/5 (A) vizsgáltuk 5/5 (A) II. példa A) In vitro aktivitás Theileria parvával és Theileria annulatával szemben In vitro vizsgáltuk az R helyén metílesoportot tartalmazó (113) általános képletű vegyület hatékonyságát. Theileria parva és Theileria annulata parazitákkal szemben, összehasonlító anyagként az ismert, teileriózisellenes hatású 2-hidroxi-3-ciklohcxil-l,4-naftokinont használtuk. Szarvasmarha limfoblasztoid sejteket megfertőztünk makroschizonta szakaszban lévő Theileira parvával, és a tenyészetet 48 órán át inkubáltuk 2 - [transz - (4 - tercier - bu til - ciklohexii) - metil] -3-hidroxi-l,4-naftokinon és 2-hidroxi-3-ciklohexil-l,4-naftokinon jelenlétében. A vizsgálat során e vegyületek különböző koncentrációkban voltak jelen. A kontrollként alkalmazott tenyészeteket a vizsgált vegyületek nélkül inkubáltuk. Az ED50-értékck meghalárdzásához négyszeres hígításokat használtunk az egyes vegyületekből, és legalább két vizsgálatot végeztünk mindegyik vegyülettel. Az ED50-érték az a vegyületkoncentráció (mg/liter dimenzióban), amely ahhoz szükséges, hogy a tenyészet schizontával fertőzött sejtjeinek mennyiségét 50 %-ra csökkentse a vegyületekkel nem kezelt kontroll csoporthoz képest a 48 órás inkubálási időszak alatt. A kapott eredményeket a 4. táblázatban adjuk meg. 4. táblázat ed50 (mg/liter) Vegyület T parva T. annulata parazitákkal szemben (IB) általános képletű, ahol R = metilcsoport 0,0002 0,005 2-hidroxi-3-ciklohexil-1,4- naftokinon 0,006 0,100 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 9
