196312. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aktivált polimer-anyagú hordozó előállítására

15

196 312

16

4-6 órás 37 °C-on végzett inkubálás után a hordozót ismételten mossuk, majd peroxidáz enzimmel kapcsolt birka-anti-nyúl-IgG-vel 4 órán át 37 °C-on vagy egy éjszakán át szobahőmérsékleten inkubáljuk, ismételten mossuk és az enzim-aktivitást alkalmas módszerrel (pl. 4 mmólos o-lenilén-diaminnal cs 1,5 mólos HjOj-dal az elszíneződés vizuális megfigyelésével) megállapítjuk. A pozitív elszíneződés egyértelműen az antitest jelenlétére utal.

32. példa

32 P-foszfoproteint (szívizom membránhólyagból kinyerve) foszfáttal puffcrolt nátrium-dodccil-szulfátpoliakrilamid-gél-eleklroforézisscl (K. Weber, J. Pringle, M. Osbor, Meth. Enzymol. 26 /1972/ 3) elválasztunk, majd rögtön utána a találmány szerinti aktív papírhordozóra visszük és trietanol-amint és vajsavat tartalmazó transzfer rendszerben Kyhse-Andersen szerint (J. Biochem.: Biophys. Meth. 10 /1984/ 203) immunoblotting-nak vetjük alá, majd foszfáttartalnni fiziológiás konyhasóoldatbnn, amely még 0,1 % zselatint és 0,05 % Twecnt is tartalmaz, öblítjük, és ezután először nyúl-antiszérummal, majd anti-nyúl-IgG-torma-peroxídáz konjugátummal inkubálunk, amely műveleteket egy indikátor-reakció követ. A peroxidázkonjugátum helyett azonos eredménnyel alkalikus foszfatáz-konjugátum is alkalmazható.

33. példa

Különböző izomsejlckből származó sejten belüli metakrilát/etilénglikol-dimetakrilát kopolimerek, cellulóztartalmú anyagok, felületének aktiválására, azzal jellemezve, hogy a polimertestek felületén levő az elcktroforézis után a gélt 20—60 percen át 25 mmól trictanol-amin-hidrokloridból (pll = 8,4) és 0,1 % nátrium-dodecil-szulfáthól álló puffer oldattal öblítjük, majd a 32. példában leírtak szerint immunoblottinghoz alkalmazzuk.

Szabadalmi igénypontok

5

10

15

20

25

30

35

40

45

1. Eljárás hidroxilcsoportokat tartalmazó természetes és mesterséges polimer-anyagú hordozók, előnyösen agaróz alapú poliszaccharidok, hidroxi-etilmctaklilát/ctilénglikol-dimetakrilát kopolimerek, cellulóztartahmi anyagok, felületének aktiválására, azzal jellemezve, hogy a polimertestck felületén levő hidroxilcsoportokat (I) általános képletű — a képletben

X jelentése amino-, glicid-oxi- vagy szülfhidril-csőport,

R' jelentése 1-5 szénalomos a I kilén cső port és R jelentése 14 szénatomos alkoxiesoport, n' jelentése 1 és 5 közötti szám és

n jelentése 1 és 3 közötti szám —

vegyüld tel, vagy legalább két (I) általános képletű vegyüld keverékével, vagy egymást követően két (1) általános képletű vegyiilettel reagáltatjuk folyadék vagy gáz fázisban, majd adott esetben glutáraldehiddel vagy N-sznkcinimidiI-3-(2-piridil-ditio)-propionáttal még egy további kezelést végzünk.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű vegyülcfck és a hidroxilcsoporlok rcagállatását szerves oldószerben, oldós/.crclegybeu, vizes oldatban vagy víz és szerves oldószer elegyében végezzük.

3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hidroxilcsoportok átalakítását gázfázisban aeroszollal vagy atmosz.rérikus nyomás alatti nyomásértéken végezzük.

4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy formázott polimertestet alkalmazunk.

5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy gömb-, szál- vagy szögletes formájú polimertestet alkalmazunk.

6. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy golyó formájú polimcrtcstct alkalmazunk.

7. A 4-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a formatesteket töltéssel, szövéssel vagy kötőanyag segítségével kolonna-töltetté vagy sík lapokká alakítva alkalmazzuk.

8. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy polimer formatcstként vékony, más hordozó felületén film- vagy lakkréteg formájában kiképzett réteget alkalmazunk.

1 db ábra

9