196241. lajstromszámú szabadalom • Biotechnológiai eljárás kobamid származékok előállítására
1 196 241 2 c) Szakaszos termelő fermentálás A félfolyamatos fenntartó fermentálás során naponta elvett 5 I fermentlevet a hatóanyagtartalom növelése céljából szakaszosan az alábbi módon ufófermentáljuk: A fermentlevet 5 1 hasznos térfogatú tivegfermentorba töltjük, majd az alábbi tápanyagokat adjuk hozzá: 45 ml metanolt, 3.5 g 50% szárazanyagtartalmú kukoricalekvárt, vagy 14 g 25% szárazanyagtartalmú kukoricamoslékhidrolizátumot, 2.5 g ammónium-hidrogén-karbonátot, 1.5 g ammónium-szulfátot, 0,005 g kobalt-kloridot, 0,01 g hidroxi-benzimidazol-hidrokloridot, A tápanyagok beadagolása után a fermentort gumilappal lefedjük és egy napig 32—34 °C hőmérsékleten állni hagyjuk, a következő napon (2. nap) újabb tápanyagokat adunk hozzá: 20 ml metanolt, 3 g kukoricalekvárhidrolizátumot, vagy 6g kukoricamoslék hirdoiizátumot, 1.5 g ammónium-hidrogén-karbonátot. A tápanyagok beadagolása után a fermentlevet ismét gőndosan összekeverjük, a fermentort gumilappal lefedjük és még egy napig 32—34 °C hőmérsékleten állni hagyjuk. A második nap után a fermentlé hatóanyagtartalma: 17,5 mg III. faktor/1 és 3 mg B,2 vitamiá/1. 2. példa Az 1. példa szerint járunk el, azzal a változtatással, hogy 5-hidroxi-benzimidazol prekurzor helyett 3,4-diamino-fenoli alkalmazunk. Az 1. példa a) pontjában leírt módon inokuium fermentlevet állítunk elő, azzal a különbséggel, hogy az első generáció előállításánál 0,1 g 3,4-diamino-fenol-hidrokloridot, a második generáció előállításánál 0,5 g 3,4-diamino-fenol-hidrokloriüot oldunk fel a tápközegben az 1/a példában megadott 0,04 g, illetve 0,2 g 5-hidroxi-benzimidazoi-hidroklorid helyett. Az 1. példa b) pontjában leírtakkal azonos módon folyamatosítjuk a fermentációt azzal a különbséggel, hogy a folyamatosításkor 0,1 g, majd a folyamatosítás 6—8. napjától 0,2 g 3,4-diamino-fenol-hidrokloridot adunk a tápközeghez az 1/b példában megadott 0,05 g, illetve 0,06 g 5-hidroxi-benzimidazol-hidroklorid helyett. Az 1. példa c) pontjában leírtakkal azonos módon szakaszos termelő fermentációt végzünk, azzal a különbséggel, hogy 0,015 g 3,4-diamino-fenol-hidrokloridot adunk a tápközeghez az 1/c példában1 megadott 0,01 g 5-hidroxi-benzimidazoI- hidroklorid helyett. Az így előállított termelő fermentlé hatóanyagtartalma: 12 mg III. faktor/1 és 2,5 mg B12 vitamin/1. 3. példa Az 1. példa szerint járunk el azzal a változtatással, hogy 5-hidroxi-benzimidazol prekurzor helyett 6 3,4-dinitro-fenoít alkalmazunk. Az 1. példa a) pontjában leírt módon inokuium fermentlevet állítunk elő azzal a különbséggel, hogy az első generáció előállításánál 0,2 g 3,4-dinitro-fenolt, a második generáció előállításánál 1,0 g 3,4-dinitro-fenolt, oldunk fel a tápközegben az í/a példában megadott 0,04 g, illetve 0,2 g 5-hidroxi-benzimidazol-hidroklorid helyett. Az 1. példa b) pontjában leírtakkal azonos módon folyamatosítjuk a fermentációt azzal a különbséggel, hogy folyamatosításkor 0,2 g, majd a folyamatosítás 6—8. napjától 0,04 g 3,4-dinitrofenolt adunk a tápközeghez az 1/b példában megadótt 0,05 g, illetve 0,06 g 5-hidroxi-benzimida^pl-hidroklorid helyett. Az 1. példa c) pontjában azonos módon szakaszos termelő fermentációt végzük azzal a különbséggel, hogy 0,015 g 3,4-dinitro-fenolt adunk a tápközeghez' az 1/c példában megadottak 0,01 g 5-hidroxi-benzimidazol-hidroklorid helyett. Az így előállított termelő fermentlé hatóanyagtartalma: 8 mgIII. faktor/1 és2 tpg B12 vitamin. 4. példa Az 1. példa a) pontjában leírtakkal azonos módon inokuium fermentlevet állítunk elő. Az 1. példa b) pontjában leírtakkal azonos módon folyamatosítjuk a fermentációt azzal a különbséggel, hogy a folyamatosítás első napján 0,15 g 5,6-dimetil-benzimidazolt és 0,5 g 5-hidroxi-benzimidazol-hidrokloridot, a folyamatosítás elsó 6—8 napján 0,03 g 5,6-dimetil-benzimidazc'-hidrokloridot, majd a folyamatosítás 6—8. napjától a továbbiakban 0,03 g 5,6-dimetil-benzimidazolt és 0,075 g 5-hidroxi-benzimidazol-hidrokloridcí adunk a tápközeghez az 1/b példában megadott 0,05 g, illetve 0,06 g 5-hidroxi-benzimldazol-hidroklorid helyett. Az 1. példa c) pontjában leírtakkal azonos módon szakaszos termelő fermentációt végzünk azzal a különbséggel, hogy 0,01 g 5,6-dimetil-benzimidazolt és 0,02 g 5-hídroxi-benzimidazoi-hidrokloridot adunk a tápközeghez az 1/c példában megadott 0,01 g 5-hidroxi-benzimidazol-hidroklorid helyett. Az így előállított termelő fermentlé hatóanyagösszetétele: 4,5 mg III. faktor/1 és 17,5 mg B12 vitamin/1. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás 5-hidroxi-benzimidazoül-kobamid koenzim vagy 5-hidroxi-benzimidazoIil-kobamid, kívánt esetben 5,6-dimetil-benzimidazolil-kobamid koenzimmel vagy 5,6-dimetil-benzimidazolilkobamiddal való együttes előállítására részben ismert prekurzor(oka)t tartalmazó tápkőzegben 24 A 1 jelzésű Corynebacteriuir. sp., 239 A,/6 jelzésű Propinibacterum sp., és MC—017 jelzésű Metanoccocus sp. fajokból álló mező fii, metántermeíó vegyes mikropopulációval anaerob, szeptikus körülmények között végzett fermentálás útján, azzal jellemezve, hogy perkurzorként 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
