196229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A 40926 antibiotikum N-acilamino-glukuronil-aglikonjai és az A 40926 antibiotikum aglikonjai, valamint az ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 196229 2 A találmány szerinti vegyületek antibakteriális aktivitását in vitro standard hígításos vizsgálatokkal határozhatjuk meg, különböző mikroorganizmus tenyészetek alkalmazásával. Az A 40926 antibiotikum A faktor fizikokémiai jellemzői A) a 11. ábra szerinti UV abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja: a) 0,1N HC1 b) pH 7,38 foszfát puffer c) 0,1N nátrium- vagy káliumhidroxid d) metanol e) pH 9,0 foszfát puffer 0 lambda max (nm) 281 281; 300 (váll) 300 282 282 300 (váll) 10 15 B) a 12. ábrán bemutatott IR abszorpciós spekt- 2C rum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm-1): 3700—3100; 3100—2800; (nujol); 1635; 1620— 1560; 1510; 1480—1410 (nujol); 1375 (nujol); 1320—1250; 1250—1190; 1100—950; 845; 810; 25 720 (nujol) C) a 15. ábrán bemutatott 'H—NMR spektrum, amely a következő jel-csoportokat mutatja (ppmben) 270 MHz-en, DMSO—d«-ban (hexadeutero-dimetil-szulfoxid) felvéve, belső standardként 3C TMS-t (0,00 ppm) alkalmazva (delta, ppm): 0,86 (t-k, 6H); 1,21 (kb. 11H); 1,43 (2H); 2,01 (2H); 2,31—2,34 (3H); 4—6,2 (kb. 16H); 6,2-8 (kb. 23H); 8,44; 9,22; 9,66 (széles sávok, mozgékony protonok) 2,5—4: interferencia a H20 csú- 35 csők hatására D) retenciós idő (Rt) 1,22 a teikoplanin A2 2 komponenséhez viszonyítva (Rt = 20,3 perc) az elemzést fordított fázisú HPLC-vel a következő körülmények között végezve: 4C oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm/Altex/Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm) A eluálószer : CH3CN 10% 45 NaH2P04-H20 (2,5 g/1) pH 6,0-ra beállítva B eluálószer: 90% CHjCN 70% NaH2 P04-H20 (2,5 g/1) pH 6,0-ra beállítva 30% 50 eluálás: lineáris grádiens 5%—60% B eluálószer az A eluálószerben, 40 perc alatt áramlási sebesség: 1,8 ml/perc UV detektor: 256 nm 55 belső standard: teikoplanin A2 2 komponens (Gruppo Lepetit S. p. A.) Ugyanilyen körülmények között a tesztoszteronhoz (Roussel Uclaf) viszonyított retenciós idő 0,60. E) Az elem-analízis — miután a mintát előzetesen kb. 140 °C-on közömbös atmoszférában megszárítottuk (súlyveszteség 4,6%) — a következő közelítő (átlagos) százalékos összetételt mutatja: szén 55,82%; hidrogén 5,17%; nitrogén 6,31%; klór (összes) 4,24%; klór (ionos) 0,37%. Szervetlen maradék 900 °C-on, levegőn: 1,2%. 60 65 F) Sav-bázis titrálási görbe 2-metoxi-etanol (MCS): víz 4:1 elegyben. A HCl-felesleg hozzáadása KOH-dal végzett titrálás 4 ionizálható funkció jelenlétére utal, amelyek pkMcs értékei a következők: 4,6; 5,6; 7,2; 9,2. G) Rr érték 0,24 és a teikoplanin A2 2 komponenséhez viszonyított Rf érték 0,70 a következő kromatográfiás rendszerben: 5%-os (súly/térf.) vizes Na2S04 70 acetonitril 30 szilanizált szilikagél (60 F254, Merck) lemezeket alkalmazva (rétegvastagság 0,25 mm) Előhívás: — UV fény — Pauly-reagenssel — azaz diazotált szulfanilsavval (J. Chromatogr. 20, 171, 1965; Z. Physiol. Chem. 292, 99, 1953) sárga szín — bioautográfia Bac. subtilis ATCC 6633 felhasználásával, minimális Davis táptalajon H) molekulatömeg kb. 1716 a FAB—MS spektrumból levezetve, amely 1717-nél mutatja az M + H+ csúcsot. Az A 40926 antibiotikum B faktor fizikokémiai jellemzői A) a 14. ábrán bemutatott UV abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja: lambdaTM** (nm) a) 0,1N HC1 b) pH 7,38 foszfát puffer c) 0,lN nátrium- vagy káliumhidroxid d) pH 9,0 foszfát-puffer e) metanol 282 281, 300 (váll) 300 283; 300 (váll) 282 B) a 15. ábrán bemutatott IR abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm-1): 3700—3080; 3080—2700 (nujol); 1720—1625; 1625—1560; 1505; 1460 (nujol); 1375 (nujol); 1295; 1230; 1210; 1150; 1100-1040; 1030; 1015; 970; 890; 840; 810; 720 (nujol) C) a 16. ábrán bemutatott ‘H—NMR spektrum a következő jel-csoportokat mutatja (ppm) 270 MHz-nél; a spektrumot DMSO—cL-ban (hexadeutero-dimetilszulfoxid) vettük fel, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t alkalmazva; delta (ppm): 0,85 (d, izopropil-melilek); 1,15 (kb. 13H); 1,44 (kb. 2H); 2,02 (2H); 2,32—2,35 (3H); 4—6,1 (kb. 16H); 6,1—8 (kb. 23H); 8,52; 9,30; 9,68 (széles sávok, mozgékony protonok); 2,5—4: interferencia a H2O csúcsok miatt D) retenciós idő (Rt) a teikoplanin A2 2 komponenséhez viszonyítva (Rt = 20,3 perc) 1,22 és 1,27 a következő körülmények között fordított fázisú HPLC módszerrel végzett elemzés során: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm/Altex/Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm) A eluálószer: CHjCN 10% NaH2P04 H20 (2,5 g/1) 90% pH 6,0-ra beállítva eluálószer: CHaCN 70% NaH2P04 ■ H20 (2,5 g/1) 30% pH 6,0-ra beállítva 15
