196227. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ciklikus, vazopresszin antagonista peptidek és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
196227 ? 1 . 4:1:5 eleggyel tisztítunk. A megfelelő frakciókat összegyűjtjük, szárazra pároljuk és 1 % ecetsavból liofilizáljuk. így 73 mg részlegesen tisztított pepiidet kapunk. Ezt tovább tisztítjuk gélszűréssel, Sephadex G—15-ön 0,2 n ecetsavval. A megfelelő frakciókat összegyűjtjük és liofilizáljuk. így 42 mg pepiidet kapunk. Ezt tovább tisztítjuk préparai ív HPLC segítségével Altex Ultrasphere Cig-on 29% acetonitril/0,1% TFA eluenssel. A megfelelő frakciókat összegyűjtjük, szárazra pároljuk és 1 % ecetsavból liofilizáljuk. így 34,5 g tiszta pepiidet kapunk. FAB tömegspektrometria m/z 1108 (M + H), 1106 (M—H), HPLC (izokratikus): Altex Ultrasphere Qs, 40% acetonitril/0,1 % TFA, k'= = 3,2, egy csúcs; HPLC (gradiens): A = 0,1% TFA, B = 0,1 TFA acetonitrilben, 20—50%B, 20 perc, lineáris, 50% B, 10 perc, k' =9,3, egy csúcs. 21. példa Pmp-D- Tyr(Et)-Phe- Val-Asn-Cys-D-Pro-Arg-NH2 előállítása Pmp(MeBzl)-D-Tyr(Et)-Phe-Val-Asn-Cys(MeBzl)-D-Pro-Arg(Tos)-BHA peptidil gyantát szintetizálunk az 5. példában leírt módon 0,5 mmól mennyiségben. A gyantát 15 ml hidrogén-fluoriddal és 1 ml anizollal kezeljük 0 °C hőmérsékleten 1 órán keresztül. A hidrogén-fluoridot vákuumban eltávolítjuk, a gyantát etiléterrel mossuk, majd kétszer 50 ml dimetil-formamiddal és kétszer 50 ml 40% ecetsavval extraháljuk. Az extraktumot vízzel 4 literre hígítjuk és koncentrált NH4OH segítségével pH = 7,2 értékre állítjuk. Az oldatot sárga szín megjelenéséig 0,01 mól/1 K3Fe(CN)6 oldattal titráljuk, 50 ml (az elméleti 100%-a). Ezután jégecettel pH = 4,5 értékre állítjuk és Bio-Rex 70 (H+ forma) töltetű oszlopra visszük fel. Az oszlopot vízzel mossuk és piridin/ecetsav/víz 30:4:66 eleggyel eluáljuk. Az eluátumot szárazra pároljuk és a maradékot 1 % ecetsavból liofilizáljuk. így 219 mg nyers pepiidet kapunk. 151 mg nyers pepiidet megoszlásos kromatográfiával Sephadex G—25-ön n-butanol/ecetsav/víz 4:1:5 eleggyel tisztítunk. A megfelelő frakciókat összegyűjtjük, szárazra pároljuk és 1 % ecetsavból liofilizáljuk. így 32 mg tisztított pepiidet kapunk. FAB tömegspektrometria m/z 1079 (M + H), 1077 (M—H), HPLC (izokratikus): Altex Ultrasphere Cia, 45% acetonitril, 0,1% TFA, k'=3,7, egy csúcs; HPLC (gradiens): A = 0,1% TFA, B = 0,1% TFA acetonitrilben, 20—50% B, 20 perc, lineáris, 50% B, 10 perc, k' = 10,8, egy csúcs. 22. példa Pmp-D- Tyr(Et)-Phe- Val-Asn-Cys-Pro-OBzl előállítása 20 mg (17,3 mmól) Pmp(ACM)-D-Tyr(Et)-Phe-Val-Asn-Cys(ACM)-Pro-OBzl-benzilésztert elkeverünk 1940 ml metanollal, majd szűrjük. A szűrletet 22,1 g (86,4 mmól) jód 2600 ml metanolban felvett oldatához adagoljuk laboratóriumi szivattyúval 7—8 ml/perc sebességgel. A reakcióelegyet további 2 órán keresztül keverjük, majd 650 ml térfogatra bepároljuk. A kapott sötét piros oldatot 0,5 mól/1 vizes nátrium-hidrogén-szulfit oldattal elegyítjük a szín megváltozásáig (mintegy 150 ml szükséges). Az oldatot csökkentett nyomáson 200 ml térfogatra bepároljuk, 200 ml vízzel elegyítjük és a metanolt eltávolítjuk, amelynek során szilárd terméket kapunk. A terméket 0,25 mól/1 vizes nátrium-hidrogén-szulfit oldattal és hideg vízzel kezeljük, majd szűrjük. Szárítás után a szüredéket porítjuk és 4 órán keresztül 200 ml éter/hexán 1:1 elegyben keverjük. Ezután szűrjük és súlyállandóságig szárítjuk. így 15 g cím szerinti terméket kapunk (az elméleti 89,7%-a). Szilikagélen kloroform/metanol 95:5 eleggyel kromatografáljuk, az olvadáspont 143—145 °C, [cf]^J = —12° (c=l, metanol/metilénklorid 1:1), [«1544 = 90°, FAB tömegspektrometria m/e (relatív intenzitás): 1036 (MNa-H+, 11,6), 1014 (M\100), 998 (27), 809 (88); FAB (negatív ion): 1063 (4,5), 1012 (M~-2H, 100), 922 (56), 723 (48). VRK: Rf(A) = 0,48, Rf(G) = 0,8; HPLC: RT(A) = 19,3 perc, Elemanalízis a C52H67N7O10S2 összegképlet alapján: számolt: C 61,58%, H 6,66%, N 9,67%, S6,32%, talált: C 60,25%, H 6,67%, N 9,85%, S 6,89%. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás új, (I) általános képletű vegyületek, mely képletben P jelentése Phe vagy Phe(4'-Alk), csoport, X jelentése D-Leu, D-Ile, D-Tyr, vagy D-Tyr (Et) csoport, Y jelentése NH2, NHAlk, amennyiben Z jelentése egyszeres kötés, vagy -OH, csoport, W jelentése D-Pro, L-Pro, vagy amennyiben Y és Z az általános képletből hiányzik, -OH csoport, A jelentése Val, Abu, Ala, Gly, Lys, vagy Chg csoport, Z jelentése D-Arg, L-Arg, vagy egyszeres kötés, ha Y jelentése -OH csoport, n jelentése 0 vagy 1, Alk jelentése 1—4 szénatomos alkilcsoport, előállítására, azzal jellemezve, hogy egy adott esetben védőcsoportokat tartalmazó (II) általános képletű vegyületet, mely képletben X, P, A, W, Z és Y jelentése a fentiekben megadott, Q1 és Q2 jelentése hidrogénatom vagy egy védőcsoport, Cap jelentésf /?,/?-cikloalkiIén-propionsav, mely a ^-helyzetben á- Q1-csoportot és a cikloalkilén-láncban 4—5 szénatomot tartalmaz, oxidativ úton ciklizálunk, adott esetben eltávolítjuk a védőcsoportokat, és kívánt esetben a következő reakciókat hajtjuk végre bármilyen sorrendben: a kapott W helyén -OH csoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületet kívánt esetben (NH2)-W-Z-Y képletű vegyülettel — amely kép5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 16
