196225. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új pirrolidon-acetamid származék, valamint ezen vegyületet tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 196225 2 sú, alkalmas az időskori vagy különböző megbetegedések, például az Alzheimer megbetegedés következtében fellépő tanulási és emlékezési nehézségek leküzdésére. Az ilyen megbetegedések következtében fellépő észlelési rendellenességek az agy kolinergikus rendszerének hiányosságaira vezethetők vissza, ezt morfológiailag (B. E. Tomilson, „Biochemistry of Dementias”; P. J. Roberts Ed.; John Wiley and Sons, New York, N. Y. 15—22. oldal, 1980) neurokémiai úton (R. T. Bartuy és mtsai, Science, 217, 408, 1982) igazolták. Ismert, hogy az észlelési funkciók gyengülése a legkézenfekvőbb és leggyengébb tünete az Alzheimer betegségnek és az időskori Alzheimer típusú elmebajnak. Emellett az antikolinergikus hatású szkopolamin embereknél (D. A. Drachmán, Archs. Neurol., Chicago, 30, 113, 1974) és állatoknál is (D. A. Eckerman, Pharmacol. Biochem. Behav. 12 595, 1980) jelentős emlékezetkiesést okoz, ami a meghatározott agyi területeken, így az agykéregben és a hippokampuszban létrejövő acetilkolin-koncentráció csökkenésnek a közvetlen következménye. Az előzőekben leírtaknak megfelelően az (1) képletű vegyületet patkányokban a szkopolaminnak az emlékezetet megbontó hatása, valamint a hippokampuszban az acetilkolinszint csökkenésével szembeni aktivitása útján vizsgáltuk. Az emlékezetre és a tanulási képességre kifejtett hatás vizsgálatához hím Wistar patkányoknál (150—160 g) a passzív elkerülési vizsgálatban egy próbalépést alkalmaztunk. A berendezés lényegében megegyezett Essman (Pharmacol. Res. Commun., 5, 295, 1973) által leírt berendezéssel. Egy világos dobozból egy sötét dobozba való átjárás lábra adott elkerülhetetlen sokkokkal volt megnehezítve. Az állatoknak egyszeri tanulási periódus után meg kellett tanulniuk a világos kamrából a sötét kamrába való átjárást. Az első periódus (tanulási periódus) után 30 perccel a tanulást minősítettük (ellenpróba) az állatoknak a világos Kamrát való elhagyása és a sötét kamrába való belépése között eltelt idővel (másodpercekben). A tanulási hatást 60 perccel a tanulási szakaszba való lépés előtt szkopolaminnak (0,63 mg/kg, i.p.) az adagolásával gátoltuk. A szkopolamin adagolása után 30 perccel i.p. sóoldatot vagy vizsgálati vegyületet adagoltunk. A kontroll csoport tagjait hasonló módon, de csak sóoldattal kezeltük. Az A vegyüle re [(1) képletű vegyület] vonatkozó eredményeket az 1. táblázatban adjuk meg. 5 10 15 20 25 1. táblázat Az A vegyület hatása a szkopolamin (0,63 mg/kg, i. p.) által kifejtett gátló hatásra A kezelés3 Az adagolás mg/kg i. p. Tarulási szakasz Időtartamb Ellenpróba szakasz különbség Sóoldat _ 23,06 129,20 106,14** Szkopolamin — 26,04 36,09 10,5 A + szkopolamin 100 25,41 92,01 66,60* A + szkopolamin 300 28,00 150 felett 122** felett a = minden kísérleti csoportban 5 patkányt használtunk b = a kísérlet befejezésének ideje: 150 másodperc * Dunnet-vizsgálat : p<0,05 ** Dunnet-vizsgálat: p< 0,001 A hippokampuszban az acetilkolinszint meghatározására Jenden és mtsai („Choline and Acetylcholine: Handbook of Chemical Assay Methods”, I. Hanin Ed., Raven Press, 135—150 oldal, 1974) módszerét alkalmaztuk Wistar patkányoknál. Az állatokat a szkopolamin adagolása (0,63 mg/kg, i. p.) előtt 30 perccel sóoldattal vagy vizsgálati vegyülettel előkezeltük. A kontroll csoport tagjait hasonló módon kezeltük, de csak a megfelelő hordozóval. A szkopolamin adagolása után 90 perccel az állatokat mikrohullámú besugárzással megöltük, a hippokampuszt eltávojítottuk az agyból és 0,4 n perklórsav-oldatban homogenizáltuk. Centrifugálás után a tiszta felülúszóhoz egymást kővetően butiril-kolint (belső standard), majd kálium-acetátot adtunk. További centrifugálás után a mintákhoz tetrametil-ammónium-kloridot és ammónium-reineckátot (Reinecke-sót) adtunk, hogy az acetilkolint kicsapjuk. A kivált pelleteket az előírásnak megfelelően kezeltük (Jenden és mtsai, mint az előzőekben megadott irodalmi hely). Végül a mintákat 0,1 ml etil-acetáttal extraháltuk és 1 ml mintát nitrogén-foszfor detektorral ellátott HP Sigma 3B gázkromatográfba injektáltuk. Az A vegyülettel [(1) képletű vegyület] kapott 45 eredményt a 2. táblázatban adjuk meg. 2. táblázat Az A vegyület aktivitása a szkopolamin által 50 (0,63 mg/kg, i. p.) indukált acetilkolinszint (Ach) csökkenésére patkányok hippokampuszában Kezelés3 Az adagolás mg/kg i. p. Ach-szint mmól/g A szkopolaminnal szembeni különbség Sóoldat — 21,68 12,87** Szkopolamin — 8,81 — A + szkopolamin 100 18,10 9,29* A + szkopolamin 300 21,04 12,23** a = minden kísérleti csoportban 5 patkányt hasz- 65 núltunk. * Dunnet-vizsgálat: p<0,01 ** Dunnet-vizsgálat: p<0,001 3
