196220. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antraciklin származékok előállítására
15 HU 198220 B 16 H3BO3 MnCl2.4HzO FeSCM CuCh ZnCh C0CI2 Mg2Mo0i.2H20 Na-tartarát Ebből a tőrzsoldatból a ként 1 ml-t adunk. Amint az eredmények mutatják, a legjobb növekedést a 3% glükóztartalmú Ex tápközeggel kapjuk. 285 mg 1800 mg 1360 mg 26,9 mg 20,8 mg 40,4 mg 25,2 mg 1770 mg tápközeghez literen-10 2. példa 15 Nagy mennyiségű S-184 heteropoliszacharid fermentációs előállítását a következőképpen végezzük. 100 ml YM tápközeget (Difco) tartalmazó 500 ml-es Erlenmeyer lombikot beoltunk egy 20 oltókacsnyi, tápagarról vett 48 órás tenyészettel. A lombikot 24 óra hosszat 30 °C-on inkubáljulc egy 400 ford/perc sebességgel mozgó rázógépen. Két 500 ml-es Erlenmeyer lombikban 1%-os inokulumot készítünk 100 ml 25 oltó-tápközeggel. Az oltó-tápközeg összetétele: Glükóz 3% K2HPO4 0,5% NH4NO3 0,09% MgS04.7Hz0 0,01% Promosoy 100 0,05% A tápközeget csapvízzel készítjük. A lombikot 30 °C-on 24 óra hosszat inkubáljuk 35 egy 400 ford/perc sebességgel mozgó rázógépen, majd egy 3000 ml (ugyanolyan összetételű) tápközeget tartalmazó 5 literes fermenter beoltására használjuk. A fermentálást 30 °C-on 1 1/perc levegőztetési sebesség mellett végezzük. A keverést 400 ford/perc sebességgel kezdjük, és addig emeljük, amennyi a jó keveredést biztosítja. 24 óra múlva 2,5 liter kivett oltóanyaggal beoltunk egy, 20 liter következő tápközeget tartalmazó 30 literes fermentort: glükóz 3,0% K2HPO4 0,05% NH4NO3 0,09% MgS02.7Hz0 0,01% Promosoy 100 0,05% Fe44 1 ppm Sag 5691 0,005% (habzásgátló, Union Carbide gyártmánya) A hőmérsékletet 30 °C-on tartjuk, a levegőztetést 22 óra hosszat 5 1/perc sebességgel, majd 10 1/perc sebességgel végezzük a fermentáció befejeztéig. A pH-t 6,3 fölött tartjuk KOH (40%-os) adagolásával automatikus pH-szabályozó rendszerrel. A keverést 300 ford/perc sebességgel kezdjük, majd 22 óra múlva 400 ford/percre és a fermentráció 45. órájától 700 ford/perc sebességre emeljük, és ezt a sebességet tartjuk a fermentáció befejeztéig. A fermentáció eredményeit a VI. táblázatban foglaljuk össze. VI. táblázat Idő pH Fermentlé Kitermelés Maradék (óra) viszkozitása szénforrás (cP) (g/100 ml) (%) 0 7,0 ND ND 3,0 22 6,3 620 ND ND 45 6,9 4200 1,26 0,41 68 7,2 5100 1,37 kevesebb mint 0,1 Megjegyzés: ND = nincs adat A fermentlét mintegy 75 °C-on tartjuk 50 15 percig, majd kb. 30 °C-ra hűtjük. A fermentlét háromszoros térfogatú 99%-os izopropanolhoz adjuk. A poliszacharid szálas csapadék formájában kiválik, amelyet könnyű leszűrni. A csapadékot 60 °C-on tálcás lég- 55 szárítóban 2,5 óra hosszat szárítjuk, majd porrá őröljük. 3. példa Egy 100 ml YM tápközeget (Difco) tar- 60 talmazó 500 ml-es Erlenmeyer-lombikot beoltunk egy oltókacsnyi, tápagarról vett 48 órás tenyészettel. A lombikot 24 óra hosszat 30 °C-on inkubáljuk egy 400 ford/perc sebességgel mozgó rázógépen. Öt 500 ml-es Er- 65 le nme y er lombikban 1%-os inokulumot készítünk 100 ml oltó-tápközeggel. Az oltó-tápkőzeg összetétele: Glükóz 3,0% K2HPO4 0,5% NH4NO3 0,09% MgS04.7H20 0,01% Promosoy 100 0,05% Fe*4 1 ppm Csapviz A lombikokat 30 °C-on 24 óra hosszat inkubáljuk egy 400 ford/perc sebességgel mozgó rázógépen, és ekkor beoltunk velük egy 14 literes fermentort, amely 10 1 végső térfogatnak megfelelő tápközeget tartalmaz. A 10
