196219. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagytisztaságú akarbóz, valamint hatóanyagként ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 196 219 2 Példa Eluáláshő- Fófrakció mérséklete térfogata Kitermelés HPLC-szerinti tartalom °C ml g % % 3. 50 570 6,04 91 90 4. 60 460 5,92 86 92 5. 70 380 6.62 99 94 5 6. példa Egy kromatografáló oszlopot (Pharmacia K 26/ 15 70) az 1. példa szerinti módon CM-ScphadcxR C 25 töltettel töltünk meg, a kiegyenlítést azonban 4,3 pH-nál végezzük. A töltet magassága 47 cm. Tcsztanyagként az 1. példában alkalmazott akarbózt használjuk, 200 ml vízben 579(XX) SIE meny- 20 nyiséget viszünk fel. Az átfolyási sebességet 117 ml/óra (22 cm/óra) értéken tartjuk. Az eluálást vízzel végezzük, az 1. példához hasonlóan először a sótartalmú frakciók eluálnak, végül az akarbóz. A sótartalmú frakciók vége és az akarbóz eluátum 25 kezdete közötti távolság 162 ml. Az akarbóz eluációját az oszlop 45°C-ra történő melegítésével meggyorsítjuk. Az akarbózfrakció térfogat 1048 ml, kitermelés 577000 SIE, amely a felvitt mennyiségnek 100%-a. 3r A 6. példa szerinti módon egy kromatografáló oszlopot CM—SephadexR C 25 töltettel töltünk meg, a kiegyenlítést azonban 4,9 pH-nál végezzük. 200 ml 579000 SIE tesztoldatot viszünk fel, és az 40 anyagot vízzel eluáljuk. A sótartalmú frakciók és az akarbózfrakciók kezdete előtt mindöszc 23 ml a különbség. A főfrakció térfogata 707ml, azeluálás szinten 45°C-on történik. A kitermelés 577000 SIE, amely a felvitt mennyiségnek 100%-a. 45 8. példa 50 Egy kromatografáló oszlopot (Pharmacia K 26/ 40) CM—SepharoseR Cl 6B fast flow töltettel töltünk meg, 4,5 pH-nál 0,2 mólos nátrium-acctát- J oldattal kiegyenlítjük, és vízzel kimossuk. 40,5 ml előtisztított akarbózt, amelynek gátlóhatása 247 000 SIE viszünk fel az oszlopra. Az átfolyási sebességet 100 ml/óra (18,8 cm/óra) értéken tart- „ juk. Az eluálást gázmentesített desztillált vízzel végezzük, az oszlopot az akarbóz eluálása kezdetekor 45 °C-ra melegítjük. A só- és akarbózfrakciók közötti távolság 38 ml, a főfrakció térfogata 600 ml. Akarbóz kitermelése 247000 SIE, amely a gg felvitt mennyiség 100%-a. HPLC-inódszcr szerint a tartalom 98%. 9. példa Egy 8. példa szerinti kromatografáló oszlopot Carboxymethylccllulosc CM 52R (Whatman) töltettel töltünk meg, 0,2 mólos nátrium-acctát-oldattal, 4,5pH-nál kiegyenlítjük és vízzel kimossuk. A töltet magassága 36 cm. 62 ml előtisztított akarbózt, amelynek gátló hatása 394000 SIE a 8. példa szerinti módon felviszünk és eluálunk. Az akarbózfrakció közvetlenül követi a sótartalmú frakciót. Az akarbózfrakció térfogata 850 ml, kitermelés 322 000 SIE, amely a felvitt mennyiség 82%-a. HPLC-módszcr szerint a tartalom 90%. 10. példa Egy 8. példa szerinti kromatografáló oszlopot Matrcx-Cellufine CMR (Amicon) töltettel töltünk meg, 0,2 mólos nátrium-acctát-oldattal 4,5 pH-nál kiegyenlítjük, és vízzel kimossuk. A töltet magassága 37 cm. 62 ml előtisztított akarbóz-oldatot, melynek gátló hatása 394000 SIE viszünk fel, és a 8. példa szerint eluálunk. Az akarbózfrakció a sófrakciót 23 ml távolságban követi. Az akarbóz frakció térfogata 960 ml, kitermelés 350000 SIE, amely a felvitt mennyiségnek 89%-a. HPLC-módszer szerint a tartalom 98%. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás akarbóz előállítására, amely víz mellett 10 tömeg%-nál kevesebb cukorszerű komponenst tartalmaz, azzal jellemezve, hogy előtisztított akarbózt 1—20 tömeg%-os oldatban, 4—7 pH-értéknél egy oszlopra viszünk fel, amely töltetként karboxilcsoportokat tartalmazó, dextrán-, agarózvagy cellulózalapú vagy ezeknek poliamid-származékát tartalmazó töltetet tartalmaz, az oszlopot kizárólag gázmentesített desztillált vízzel eluáljuk, cs adott esetben az akarbózt az eluátumból szokásos módon izoláljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az oszlop töltettérfogatának megfelelő mennyiségű előtisztított akarbóz-oldatot viszünk fel. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az oszlopra az oszloptérfogat 60%ának megfelelő térfogatú előtisztított akarbóz-oldatot viszünk fel. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az előtisztított akarbóz-oldat pH-ja 3,5—6,0 előnyösen 4,0—5,5. 5
