196195. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új l,4-diszubsztituált piperazin származékok és a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
5 196195 6 Az MPTP-ról 1979-ben írták le, hogy a dopaminerg rendszer neuronjainak degenerációját okozza emberen és majmokon [lásd: DaviB, G. C. és munkatársai: Psychiat. Res. 1, 249-254, (1979); Burns R. S, és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sei. (USA) 80, 4546-4550 (1983)], majd a vegyület szelektív dopaminerg károsító hatásét egereken is kimutatták, pl.: Hallman H. és munkatársai: Eur. J. Pharmacol. 97. 133-136 (1984); Pileblad E. és munkatársai: Neuropharmacol. 24, 689-694 (1985). Az MPTP-vel, kísérleti állatokon létrehozott szelektív dopaminerg károsító hatás a humán dopaminerg rendszer degenerációs hipofunkciós jellegű megbetegedésével analóg folyamatnak tekinthető és alkalmas modell olyan vegyűletek vizsgálatára, melyek a terápiában a dopaminerg rendszer kóros működésével kapcsolatos betegségek kezelésére szolgálhatnak [Bradbury, A. J. és munkatársai: The Lancet 1444-45, (1985); Przuntek, H. és munkatársai: Life Sei. 37, 1195-1200 (1985)]. A vizsgálatokhoz 20-25 g-os hím, CFY egereket (LATI, Gödöllő) használtunk. A vegyületeket 1%-os Tween-80 oldatban homogenizáltuk és 0,1 mmol/kg-os dózisban a táblázatban megadott módon 1 órával a MPTP előtt adtuk az állatoknak. Az MPTP-t fiziológiás sóoldatban frissen feloldva 70 mg/kg-os dózisban subeutan Bdtuk az egereknek. Az állatokat az MPTP adása után 72-96 óra múlva dekapitálóssal leöltűk, az agyat gyorsan eltávolitottuk, jéghideg fiziológiás sóoldatban lehütöttük és striatumot kiboncoltuk, majd szárazjégen lefagyasztottuk. A szövetek súlyát (fagyott állapotban) lemértük, 1 ml 0,4 N jéghideg, 0,5% NajSiOs-t, 0,25% NasEDTA-t és 100 ng N-metil-dopamin (internal standard a cetecholaminok meghatározásához) tartalmazó perklórsavban Ultra-Turrax készülékkel elhomogenízáltuk. A homogenátumot 20 000 g-vel centrifugáltuk 10 percig +4 °C-on, majd a felülúszóból 0,8 ml-t kivettünk. 20 mg aktivált AbOs hozzáadása után a pH-t 0,8 ml 0,5 M-os Tris oldattal 8-ra állítottuk és a csöveket 20 percig rázattuk. Az alumínium-oxidot ülepítettük, a felülÚBZÓt leszívattuk, majd háromszor 5 ml deszt. vízzel mostuk. Az alumínium-oxidon abszorbeálódott catecholaminokat 1 ml 0,05 n perklórsavval eluáltuk. Az eluátum egy részletéből dopamint határoztunk meg nagynyomású folyadékkromatográfiával elektrokémiai detektálással: (Labor MIM OE-320 pumpa, 4x xl50 mm-es Nucleosil 5 C-18 analitikai és 4x x20 mm-es Nucleosil 5 C-18 előtét oszlop, glaBBy-carbon munkaelektróddal és Ag/AgCh referenciaelektróddal ellátott elektrokémiai detektor, Eltron potenciosztat, LKB 2110 kétcsatornÓB rekorder, oxidációs potenciál: 600 mV, mobil fázis 0,1 M NaHîPO«, 1 mM NajEDTA,, 1 mM oktánszulfonsav, mely 8,5% acetonitrilt tartalmaz, folyási sebesség 1 ml/ /perc). Az alkalmazott módszerrel a striatum dopamin szintjének 50-60%-os csökkenése érhető el. Az MPTP indukált dopamin depléció védését a következőképpen számítottuk: (vegyület+MPTP kezelt) - - (MPTP kezelt) gátlás% = ---------------------------------------------------- x 100 (kontroll) - (MPTP kezelt) Referenciaanyagként trihexy-phenidyl-hidrokloridot alkalmaztunk 10 mg/kg í. p. dózisban. Ez kevesebb, mint a 0,1 mmól/kg, de a 10 mg/kg-nál nagyobb dózisoktól az állatok elpusztultak. Az eredményeket a 2. táblázat tartalmazza. 2. táblázat Vegyület Dózis mmól/kg Adás módja MPTP-vel indukált DA csök-kenés gátlás % n A 0.1 i. p. 94 7 p. o. 87 7 E 0.1 p. o. 69 7 Trihexy-phe nidyl.HCl i. p. 7 7 Fentiekből látható, hogy a találmány szerinti I. általános képletű új vegyűletek, orálisan és/vagy intraperitonealísan adva az állatoknak az MPTP-vel való kezelés előtt, nagymértékben vagy teljesen képesek kivédeni az MPTP neurotoxikus dopamin-szint csökkentő hatását. A vegyűletek kedvező, alacsony toxicitással rendelkeznek. Mindezek alapján a találmány szerinti új vegyűletek értékes terápiás eszközt jelentenek mindazon kórképek befolyásolására, melyekben a dopaminerg rendszer degenerációja vagy más okok miatt, dopaminerg hipofunkció áll fenn. A találmány szerinti I általános képletű új vegyületeket az alábbi eljárások szerint állíthatjuk elő: a) egy II általános képletű vegyűletet - e képletben Rí, Rj jelentése fenti és Y jelentése halogénatom, hidroxilcsoport vagy egy -OM képletű csoport, ahol M jelentése alkálifém - a III általános képletű piperazin származékkal - a III általános képletben X jelentése halogénatom, alkil-szulfoniloxi-, aril-szulfoniloxicsoport hidroxilcsoport, vagy egy -OM képletű csoport, ahol M jelentése a fenti, azzal a megszorítással, hogy (1) X jelentése hidroxilcsoport vagy egy -OM képletű csoport, ahol M jelentése a fenti, ha Y jelentése halogénatom, vagy 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
