196131. lajstromszámú szabadalom • Eljárás polipeptid vakcina előállítására
t 2 i96.ni Amint a fentebbi táblázatokban jeleztük a Cl3 egy szekunder citotoxikus T sejt választ indukál immunizált lépsejteket alkalmazva olyan egerekből, 5 amelyeket korábban szubletális dózisú PR8 vírussal fertőztünk. Az összes többi peptid-származék, amelyet tanulmányoztunk, beleértve az NS1, delta 7, delta 13, M30, NS2 és C36 peptid-származékokat, nem indukálnak ilyen választ, mivel adott hemaggluti- 1 _ nin-szerkezettel rendelkeznek. A C13 peptidre adott ' ^ válasz dózis-függő és az 5- jug/ml-től a 24 jug/ml-ig terjedő szint indukál szekunder citotoxikus T sejt választ. A megfigyelt válaszok vírus-fajlagossága feltűnő annyiban, hogy a Cl 3 stimulálja az előzőleg H1N1 ví- -jg russal fertőzött egerekből származó immunizált lépsejteket, de nem stimulálja az előzőleg H3N2 vírussal (A/PC) fertőzött egerekből származó lépsejteket. Ez nem hasonló az altípus kereszt-reaktív citotoxikus T limfocita válaszokhoz, amelyeket akkor figyelhetünk meg, amikor azonos lépsejteket stimulálunk élő 20 vírussal, legalábbis részben a kereszt-reaktív belső antigének következtében. Ezen kívül a Cl3 által történő stimulálás kereszt-reaktív a H1N1 alcsoportban levő vírus-törzsek között, a C13 által stimulált PR8-immunizált lépsejtek képesek felismerni és elpusztítani a PR8-af (H1N1 törzs 1934-ből) fertőzött 25 célsejteket éppen úgy, mint az A/Brazillal (HlNI törzs 1978-ból) fertőzött célsejteket 12 ßg és 48 ßg közti dózistartományban és nagy mértékű citotoxikus aktivitásnál. A lényegesebb adatokra alapozva kimutatjuk, «q hogy a citotoxikus T limfociták, úgy tűnik, hozzájárulnak az influenza vírus fertőzésből való kigyógyuláshoz egér-rendszerekben, és ilyen limfocita válaszokat ki lehet mutatni mind immunizált egerekben, mind emberekben [lásd Ennis és munkatársai: Microbiology, 427-430 (1984), Amer. Soc. Micro- 35 biology)], a Cl3 fehérjének az a képessége, hogy ilyen citotoxikus T sejt választ indukál több törzsnél is, jelzi hasznosságát, és a HA2 immunogén determináns hasznosságát, hogy olyan immunválaszt indukáljon, amely ellenállhat az influenza-vírus fertőzésnek, a válasz félig univerzális annyiban, hogy az 40 altípus-fajlagos, de nem törzs-fajlagos. A találmányt és előnyös kiviteli módjait a fentiekben feltártuk. A találmány azonban nem korlátozódik csak az itt feltárt speciális kiviteli módokra. Ez felöleli az Összes változatot és módosulatot, amely az itt következő igénypontok keretén belül van. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás olyan E. coli előállítására, amely állatokban influenzavírus fertőzés elleni védelem fokozására alkalmas polipeptid termelésére képes, azzal jellemezve, hogy i) két DNS szekvenciát ligálunk, amelyek közül az első az influenzavírus HA fehérjéje HA2 alegységének egészére vagy egy részére vonatkozó szekvenciát kódol, de nem kódolja a teljes HA fehérjét, míg a második DNS szekvencia az NS1 fehérje N-tenninális aminsavait kódolja, majd ii) a DNS szekvenciát ligálássai beiktatjuk egy DNS vektorba, majd iii) a kapott vektort E. coli gazda-mikroorganizmusba transzformáljuk. 2. Az 1, igénypont i) lépése szerinti eljárás, a zzal jellemezve, hogy másodikként olyan DNS szekvenciát alkalmazunk, amely az NS1 fehérje 80 N-terminális aminosavát kódolja, és a két DNS szekvenciát úgy ligáljuk, hogy az általuk kódolt polipeptid N-terminálisa az NS1 szekvencia szerinti. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a HA2 alegységet vagy részletét az A típusú influenzavírus Hl, H2 vagy H3 altípusából származtatjuk. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy vektorként PC13 plazmiddal transzformálunk. 5. Eljárás állatok influenzavírus fertőzéssel szembeni védekezését fokozó polipeptid előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1 —4. igénypontok bármelyike szerint kapott E. coli transzformánst megfelelő tápközegben tenyésztjük és a kapott polipeptidet a tápközegből elkülönítjük. 6. Eljárás állatok influenzavírus fertőzéssel szembeni védekezését fokozó vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy az 5. igénypont szerint előállított polipeptidet segédanyaggal keverjük össze. ábra nélkül Kiadja : Országos Találmányi Hivatal Felelős kiadó: Himer Zoltán o.v. KÓDEX 7
