195979. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antraciklin származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

15

195979

16

A több ismétléssel végzett kromatogréfia útján kapott tiszta komponenseket az alábbiak szerint tovább tisztítjuk.

A leírt módon többszörös oszlopkromatográfiával elkülönített A-citorodin 120 mg-ját 30 ml 3,5 pH-jú nátrium-acetát-pufferben feloldjuk, az oldatot 2 n nátrium-hidroxid-oldattal pH 7,8-ra állítjuk és 15-15 ml etil-acetáttal 4x extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat EDTA 0,001 mólos, 7,5 pH-jú oldatának 1 ml-jével, majd 2-2 ml vízzel kétszer mossuk, nátrium-szulfáttal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot kevés kloroformban feloldjuk, üvegszűrón ét leszivatjuk, heptánt adunk hozzá megzavarosodésig, végül vákuumban bepároljuk.

A-komponens

!H-NMR színkép: lásd 1. ábra abszorpciós színkép:

a) 235 (4.62) 253 (váll.) 295 (3.87)

4.95 (4.11)

b) 235 (4.62) 255 (váll.) 296 (3.92)

4.97 (4.17)

c) 243 (4.63) - 280 (3.95),

305 (3.91).

575 u. 610 (4.15)

C6ŰHS8N2O20 számított móltömeg: 1156

(FAB-MS által igazolva)

B-komponens

1H-NMR színkép: lásd 2. ábra

adszorpciós színkép:

a) 235 (4.52) 4.95 (3.94)

252 (váll.)

297

(3.83)

b) 236 (4.52) 4.95 (4.03)

253 (váll.)

295

(3.89)

c) 242 (4.40) 610 (3.83)

280

(3.89), 305

(3.69)

C60H86N2O21 (FAB-MS által i

számított

gazolva)

móltömeg:

1170

H-komponens

JH-NMR színkép: lásd 3. ábra Móltőmeg: M 1150-1300 (FAB-MS)

8. példa

E-citorodin elkülönítése preparatív nagynyomású folyadékkromatográfia útján

30 mg nyers citorodint kloroform, metanol, 96%-os ecetsav, víz és trietil-amin 400:25:50:5:0.05 arányú elegyének 0,5 ml-jében feloldunk, és az oldatot 2,5x30 cm méretű, mintegy 40 g Kieselgél Lichrosorb 60 (Merck) 7 p adszorbenssel töltött acéloszlopra visszük. A fenti oldószerelegyet nyomás alatt 6 ml/perc áramlási sebességgel áramoltatjuk az oszlopon át. 100 ml eluétumot elengedünk, utána frakciókat fogunk fel az átfolyási detektorral 260 nm hullámhosszon végzett vizsgálat, valamint analitikai HPLC módszerrel végzett ellenőrzés alapján az alábbiak szerint csoportosítjuk:

frakció

vegyületek

A-rendszerben mért Rf

43-48

F-citorodin

0.63

49-51

D+E-citorodin

0.53

52-62

E-citorodin

0.53

110-135

C-citorodin

0.44

A fenti eljárást hatszor megismételjük, és a nyert azonos összetételű frakciókat analitikai HPLC módszerrel végzett vizsgálat után egyesítjük. Mindegyik frakciót 20 ml 3,5 pH-jú vizes nátrium-acetát-pufferben feloldunk, és az oldathoz etilén-diamin-tetraecetsav (EDTA) 0,001 mólos, nátrium-hídroxid-oldattal pH 3,5-re állított oldatának 1 ml-jét, valamint 5 ml toluolt adunk. Az elegyet felrázzuk és a toluolt leöntjük. A vizes fázist 2n nótrium-hidroxid-oldattal pH 7,5-re állítjuk, majd 20 ml kloroformmal extraháljuk és nátrium-szulfáttal szárítjuk. Az oldatot vákuumban bepároljuk. Az alábbi frakciókat nyerjük:

Vegyületek

A-rendszerben mért Rt

F-citorodin

8 mg

0.63

D+E citorodin

10 mg

0.53

E-citorodin

21 mg

0.53

C-citorodin

21 mg

0.44

Az analitikai nagynyomású folyadékkromatográfiát a fenti mozgó fázissal, 4x125 mm méretű Lichrosorb Si 60 7 p adszorbenssel töltött oszlopon végeztük. A detektálás 260 nm-nél színképfotométer segítségével történt.

E-komponens

hl-NMR: lásd 4. ábra adszorpciós színkép (nm)

a) 235 495

(4.57)

(4.1)

253 (váll.)

295

(3.85)

b) 236 498

(4.58)

(4.15)

256 (váll.)

296

(3.9)

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

9