195979. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antraciklin származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
9 195979 10 A vegyületek izolálásához alkalmazott kromatográfiai módszerek kapcsán az alábbi irodalomra utalunk: fordított fázisú kromatográfia (reversed phase): (1) Laborbücher Chemie, Praxis der Hochleistungschromatographie (Veronika Mexer), 1. kiadás 1979, 117. oldaltól. Kiadó: Moritz Diesterweg Frankfurt am Main - Berlin - München (2) Heinz Engelhard, Hochdruckflüssigkeits- Chromatographie Springer-Verlag Berlin, 1. kiadás, 1975, 96. o. (3) Sebastian, E. 0., Halász, Chromatographie 7, 371 (1974) cseppentéses ellenáramú kromatográfia (DCCC) (1) K. Hostettmann, Planta medica 39, 1 (1980) (2) T. Tanimura, J. J. Pisano, Y. Ito, A. L. Bowman Science 169, (1970) A találmányt az alábbi példákkal közelebbről ismertetjük. 1. példa Az Y-ll 472 sz. Streptomyces törzs elkülönítése során 3 különböző tápkózeget használhatunk. A 2. tápközeg összetételében említett talajkivonat úgy készül, hogy tetszőleges talajmintát vízzel kiforralunk, utána szűrjük. A szűrlet tápanyagokat, ásványi anyagokat és kelátképzőket tartalmaz. Az Y-ll 472 sz, Streptomyces törzs el-10 kazein KNO3 NaCl K2HPO4 MgS04 CaCoa FeS04 agar deszt víz pH 0.3 g 2.0 g 2.0 g 2.0 g 0.05 g 0.02 g 0.01 g 15 g 1 liter 7.2-7.5 70 25 30 A tápközegeket 121 °C-on 30 percen át sterilizáljuk. b) talajminta-szuszpenzió előállítása 1 g tömegű talajmintát levegőn szárítunk, mozsárban szétdörzsölünk, majd egy órán át 121 °C-on tartjuk. Az Így kapott mintát desztillált vízben szuszpendáljuk és a szuszpenziót alaposan felrázzuk. Utána a földet hagyjuk leülepedni, és a felülúszó részszel a fenti tápközegeket inokuláljuk. c) az inokulálás 50-50 ml 1. tópkőzeget Petri-csészébe töltünk, és 1 ml talaj-szuszpenzióval inokulálunk. d) Az Y-ll 472 törzs elkülönítése Az inokulált Petri-csészéket 37 °C-on 2 héten át inkubáljuk, a növekvő mikroorganizmusok közül az Y-ll 472 számú törzset ismert módon izoláljuk. 2. példa Az antibiotikum-komplex fermentációs előállításához szükséges oltóanyag előállítása különitése Az Y-ll 472 jelű Streptomyces törzset a) a tápkőzegek előállítása az alábbi összetételű élesztős agarra adjuk: malátakivonat 10.0 g 1. tápközeg: 4C élesztőkivonat 4.0 g glükóz 1.0 g glükóz 4.0 g glicerin 1.0 g agar 15.0 g L-arginin 0.3 g deszt. viz 1 liter K2HP04 0.3 g pH 7.0 MgS04.7HzO 0.2 g 45 NaCl 0.3 g A táptalajt kémcsövekbe töltjük és élesztőkivonat 2.0 g 121 °C-on 30 percen át sterilizáljuk. A csöFez(S04)s 10 mg veket ferdén felfektetve hagyjuk kihűlni, CuS04.5H20 1 mg hogy a ferde táptalaj felület létrejöjjön. A ZnS04.7H2Ö 1 mg 50 törzzsel inkubált kémcsöveket 10-15 napon át MnS04.7H20 1 mg 28 °C-on inkubáljuk, ezen időszak végén mér agar 15 g jó növekedés és spóraképződés tapasztalható. deszt. víz 1 liter Egy-egy ferde agárról desztillált vízzel lemopH 6.5 sott spóraszuszpenziót 100-100 ml oltókőzeget 2. tápközeg: 55 tartalmazó 5 db Erlenmeyer lombik, vagy egy keményítő 2.0 g 5 literes, 1 liter oltókőzeget tartalmazó pa-L-aszparagin 1.0 g lack inokulálására használunk fel. Az oltókő-K2HPO4 0.5 g zeg összetétele: MgS04.7H20 0.5 g Glükóz 15.0 g talaj kivonat 200 ml 60 szójaliszt 15.0 g agar 15 g kukorícalekvár 5.0 g deszt. víz 800 ml CaC03 2.0 g PH 8.0 NaCl 5.0 g 3. tápközeg: desztillált víz 1 liter keményítő 10.0 g C5 pH 7.0 6
