195856. lajstromszámú szabadalom • Eljárás avermektin-származékok és hatóanyagként ezen vegyületeket tartalmazó antiparazita készítmények előállítására
5 1951156 6 adagoljuk. A savat előnyösen valamilyen sója alakjában - például nátrium- vagy ammóniumsója alakjában - adagoljuk, azonban valamilyen észterét - például metil- vagy etil-észterét - vagy amidját íb alkalmazhatjuk. A fermentáció céljára alkalmazott táptalaj egy szokásos, összetett közeg lehet, amely asszimilálható szén- és nitrogén- forrásokat valamint nyomelemeket tartalmaz. Azt találtuk azonban, hogy jobb eredmények elérése céljából egy, a Streptomyces avermitilis ATCC 31271 törzsből származó mikroroganizmus alkalmazható. A találmányunk szerint alkalmazott törzset az ATCC 31271 törzsből spontán mutációval nyerjük. Az eljárás nem reprodukálható, ezért a törzsnek ezt a variánsát is deponáltuk. A törzsek a legtöbb szempontból azonosak, csak a találmányunk szerinti eljárásban való működésük szempontjából különbőznek. A találmányunk szerint alkalmazott törzs magasabb hozamokkal adja az (I) általános képletű vegyületeket, ha részben definiált közegben („sémi definied medium”, ez olyan közeget jelent, amely részben szintetikus, azaz pontosan definiált komponenseket tartalmaz, részben pedig természetes anyagokat, például élesztőt tartalmaz; összetétele megfelel például az 1. példában megadott összetételnek) tenyésztjük. Ennek az az előnye, hogy a nyers oldószeres kivonatok lényegesen kevesebb nemkívánt anyagot tartalmaznak, s ennek következtében az elkülönítés és tisztítás jóval egyszerűbbé válik. Egy ilyen törzset a „National Collection of Industrial Bacteria (NCIb)”-ban (Iparban Alkalmazott Baktériumok Országos Gyűjteményében) 1985 július 19-én NCIB 12121 sorszámmal letétbe helyeztük. E törzs alaktani és tenyészeti jellemzőit egyébként az ATCC 31267 törzsre vonatkozóan általánosságban ismerteti az 1 573 955 számú egyesült királyságbeli szabadalmi leírás. Több napos, előnyösen 24-33 °C hőmérséklettartományban végzett fermentáció után a fermentlevet centrifugáljuk vagy szűrjük, és az elkülönített micéliumot acetonnal vagy metanollal extraháljuk. Az oldószeres kivonatot betöményítjük, és a kívánt terméket vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel - például diklór-metánnal, etilacetáttal, kloroformmal, butanollal vagy metil-izobutil-ketonnal - extraháljuk. Az oldószeres kivonatot betöményítjük, és bz (I) általános képletű vegyületeket tartalmazó nyersterméket szükség esetén további tisztításnak vetjük aló. E célra például preparativ, fordított fázisú, nagynyomású folyadékkromatográfiát alkalmazhatunk. A terméket általában olyan (I) általános képletű vegyületek keverékeként kapjuk, amelyekben: R4 jelentése (a) képletű csoport, R' jelentése hidroxilcsoporl és a 22-es és 23-as szénatomok között nincsen kettős kötés; vagy R1 hidrogénatom és a 22-es és 23- -as szénatomok között kettős kötés van; továbbá R3 jelentése hidrogénatom vagy meliJ- csoport. A kapott keverékben azonban az (1) általános képletű vegyületek arány az alkal•' mázott karbonsavtól és a fermentáció körülményeitől függően változhat. Azt találtuk, hogy számos különböző, RJC02ll általános képletű karbonsav adható a fermentációs elegyhez, aminek eredményeként a 25-ös helyzetben új szubsztituens csoportot tartalmazó avermektineket kapunk. Az alábbiakban példákat adunk meg a fermentációhoz adható Bavakra: 2-(metil-tio) popionsav; lö ciklobulankar bonsav; ciklopentónkarbonsav; ciklohexá nkar bon sav; 2-metil-ciklopropán kar bon sav; 20 3-ciklohexén-l-karbonsav; és tiofén-3-karbonsav. A találmány szerinti eljárás egyik különösen előnyös kiviteli módja a fermentációt ciklopentán-karbonBav-nátriumsó jelenlétében 25 hajtjuk végre, s így túlnyomórészt olyan (1) képletű vegyületet kapunk, amelyben R1 jelentése hidroxilcsöport, a 22-es és 23-as szénatomok között kettős kötés nincsen, H* jelentése ciklopentilcsoport, R3 metilcsoportot 30 és R4 (a) képletű csoportot jelent. A találmány szerinti eljárás egy másik előnyös kiviteli módja szerint a fermentációt tiofén-3-karbonsav-nátriumsó jelenlétében végezzük, s így túlnyomórészt olyan (I) kép- 35 letü vegyületet kapunk, amelyben R1 jelentése hidroxilcsoport, a 22-es és 23-as szénatomok között kettős kötés nincBen, R! 3-tienil-csoportot, R3 metilcsoportot és R4 (a) képletű csoportot jelent. 40 A találmány szerinti eljárás egy további előnyös kiviteli módja szerint a fermentációt 2-(metil-tio) propionsav-nátriumsó jelenlétében végezzük, 8 így túlnyomórészt olyan (1) képletű vegyületet kapunk, amelyben R1 je- 45 lenlése hidroxilcsoport, a 22-es és 23-as szénatomok között kettős kötés nincsen, K2 l-(metiltioletil-csoportot, R3 metilcsoportot és R4 (a) képletű csoportot jelent. Azokat az (1) általános képletű vegyüle- 50 leket, amelyekben a 22-es és 23-as szénatomokat kettős kötés kapcsolja össze, és R1 jelentése hidrogénatom, előállihatjuk a megfelelő olyan (1) általános képletű vegyületekböl is - ahol R1 jelentése hidroxilcsoport, és 55 a 22-es és 23-as szénatomok között nincsen kettős kötés - dehidratáció útján. Ezt az eljárást úgy hajtjuk végre, hogy előbb az 5- -ös és 4”-es helyzetekben kapcsolódó hidroxilcsoportokat szelektíven védőcsoporttal 6° látjuk el - e célra például (tercicr-butil-diir.etil-szilil-oxi)-aceti]-származékot alkalmazhatunk - s az így kapott terméket egy szu bsztífu< tio-karbonil-halogeniddel, például (4-metil-fenixo)-lio-karbonii-kloriddai 65 reagálhatjuk, majd egy magas forráspontú oldószerben, például triklór-benzolban hevit-4
