195855. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a tumorellenes hatású LL-E33288 jelű antibiotikum-komplex és komponensei előállítására
■10 195855 •11 14. példa LL-E33288 £i-I, 71-] és <C3-1 elkülönítése A 13. példa szerinti nyers I.1.-E3328H komplexből 7,2 g adagot két Sepralitc C-1H (35-65 rri-es) oszlopon (2,5 x 23 cm) kromalografálurik, és acotonitril és 0,2 mól vizes aminóriiuni-acelát '15 : 55 arányú elogyévcl eluáljuk 12 níl/perr. áramlási sebességnél, és 60 24 ml-es frakciót gyűjtünk össze mindegyik oszlopról. Az egyes frakciókat vékonyrétegkroinatográfiásan analizáljuk (EM szilikagél 60 F25» előre bevont alumínium-lemezek, 3 % izopropanol, 0,1 inól kálium-dihidro-foszfáttal telített eLil-ac.etátban eluáljuk, és UVjsínm mellett mutatjuk ki, és bioautográfiát végzünk BIA-n keresztül. A ji-I-l tartalmazó frakciókat összeöntjük, rotációs bepárolva az acetonitrilt eltávolítjuk. A vizes elegyet kétszer extraháljuk egyenlő térfogatú etil-acetáttal, az etil-acetát oldatoL vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk, bepároljuk és hexán hozzáadásával kicsapjuk. 504 mg részben tisztított 60%-os tisztaságú LL-E33288 •ji-I-t kapunk, amely j-l-t is tartalmaz. Az 0C3—1 — t és ei-I-t tartalmazó frakciókat, amelyek az oszlopról eluálódnak a ji-I előtt, külön-külón összeönLjük és feldolgozva 812 mg részben tisztított 12%-os tisztaságú cC3-I-t kapunk, valamint 1335 mg 22%áj-I-t és 20% 71-I-t tartalmazó elegyet is kapunk. 15. példa I.L-E33288-ji-I-t tisztítása 309 mg 66%-os tisztaságéi részben tisztított 71-I-t SephadexH 1,11-20 oszlopon kromatografálunk (hidroxi-propilezett dextrán) (1,5 x 90 cm) és hexán, diklórmetán és etanol 2:1:1 arányú elegyével egyensúlyozzuk ki. Az oszlopot ugyanezzel az oldószerrel eluáljuk 1,5 ml/perc áramlási sebességgel és 25 20 ml-es frakciókat gyűjtünk össze és a fenti módon analizáljuk. A tiszta 71-I-t tartalmazó frakciókat összeöntjük és az előzőekben leírt módon koncentrálva világossórga maradékot kapunk. Ezt etil-acetátban ismét feloldjuk és hexán hozzáadásával kicsapjuk. 194 mg tiszta LL-E33288 -ji-I-t kapunk. 16. példa LL-E33288 /si-1 tisztítása 61% uj-I-1 és 10/i 1—1-t tartalmazó részben tisztított elegyböl 1,05 g-ot Woelm szilícium-dioxid oszlopon kromatografálunk (32-63 p és 1,5 x 45 cm). Az oszlop etilacetáttal van töltve és egyensúlyozva. Az oszlopot 3,6 ml/perc. sebességgel 1 óra hosszal eluáljuk etil-acetáttal, majd az eluálószert etil-acetát és metanol 97 : 3 arányú elegyére változtatjuk és még 2 óra hosszat eluáljuk. 18 ml-es frakciókat gyűjtünk össze az egész eluálás alatt. Minden frakciót a fent leírt módon analizáljuk és a íi-I-t tartalmazó frakciókat összeöntjük és feldolgozzuk. 56 mg 86%-os tisztaságéi 1.E-E33288 i-I-t kapunk. A •ji frakciókat is feldolgozzuk és így 385 mg 74%-os tisztaságú LI.-E33288 -3; 1—I keletkezik. 17. példa LL-E33288 ái-I tisztítása 1.8 g, 648 mg ii-l-t és 540 rng 71-T-t tartalmazó részben tisztított elegyet Woelm szilícium-dioxid oszlopon kromatografálunk (32-63 p és 1,5 x 45 cm). Az oszlop etil-acelált.al van töltve és egyensúlyozva. Az oszlopot 3 ml/perc óránkénti sebesség mellett etil-acetáttal eluáljuk, majd az eluálószert etil-acetát és metanol 97 : 3 arányú elegyére változtatjuk és még 2 óra hosszat eluáljuk. 15 ml-es frakaciókat gyűjtünk. Az egyes frakciókat a fent leírt módon analizáljuk és a tiszta Si-l-t tartalmazó frakciókat összeöntjük és feldolgozzuk. 367 mg tiszta LL-E33288 i-I-t" kapunk. A 7-1-1 tartalmazó frakciókat is feldolgozzuk és így 574 ing 65%-os tisztaságú LL-E33288 71-I-t kapunk. 18 .példa LL-E33288 ccs-I tisztítása 1.8 g, 310 mg co-I-t tartalmazó részben tisztított mintát SephadexB LH-20 1,5 x 90 cm-es oszlopon kromatografálunk, amelyet hexán és diklór-melán és etanol 2:1:1 arányú elegyével egyensúlyozzuk. Az oszlopot is ezzel az oldószer rendszerrel eluáljuk 4 ml/perc sebességgel és 45 20 mles frakciókat gyűjtünk össze és a fent leirt módon analizáljuk. A tiszta ccs-I-t tartalmazó farkciókat összeöntjük és bepároljuk. Világossárga maradékot kapunk, melyet etil— acéléiban ismét feloldunk és hexán hozzáadásával kicsapunk. 289 mg tiszta LLE33288 «-I-t kapunk. 19. példa L1.-E33288 0C2-I előállítása LI.-E33288 72—I—bői 60%-os tisztaságú 300 mg részben tisztított 71-I-t feloldunk 60 ml 2% sósavat tartalmazó metanolban és az oldatot szobahőmérsékleten 6 óra hosszat hagyjuk állni. Az elegyet ezután kálium-karbonát telitett metanolos oldatával semlegesítjük. A kicsapódott 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 £5 C0 C 5 22
