195839. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-21978 C jelzésű ciklusos peptid származékok előállítására

:u

ííise.'ü)

32

uil.ve világosbarna port (10,3 ff) kapunk. Az anyagul (0,9 ff) metanolban (200 ml) oldjuk ón i)iT;|iarnti’v HPbC-vol tisztítjuk, „Prop LO/öystow 900" egységet és stacioner fáziekó-til Prop Pnk-500/Cis oszlopot használva. A/, oszlopul, i/.ukralikn.imi (állandó oldószer-?öfiszeLétel) cd uii Íjuk viz/motanol/acolouilril (2:1:2) Heggyel és 290 ml-cs frakciókat j.f .v új 1.0 tik, 1 Trakciói/min sebességgel. A kívánt vegyüld. a 9-22. frakcióiban oluálóidik.

A frakcióikat TLC alapján egyesítjük Jfordíl.ol.l. fázisú gzilikagél/Oin; kifejlesztve v i 7,/md.niiol/ric.elonili' il {3:3: á) eleggyel, Van tűk permetező reagenssel delük látva j. Az • •gyesi leli. frakciókat bioaulográfin segítségével vizsgálva | .szilikngél TLC, acelonilril/acelun/víz (2:2:1) oldóiszorrendszer én Micrvc.ocus íuínus detektáló) mikroorganizmus] megállapítható, hogy egyetlen bioaktiv komponenst tartalmaznak. Az eljárással 6,02 g Nrrp-IN- (n-d eh a noil)-I,-feni l-alani lJ-Nom-f-BOC-A-219780 magot kapunk [fi általános képiéin vegyülni: It = N-(n-dcknnoil-L-fenil-nlnnii);

IP - l-Bi>0|.

C. Nrrr-1 N-(ii-Ih'Uii)ioil)-L-faiiiI~iilarjj]J-.A-2I97fiC iiittif e/űs/L’/nsn

t.ombikot (100 ml) jeges fürdőben 9 °C-rn lehűlünk. A lombikba bemérünk Nti-i>-[N-(n-do kanod)-!feni 1 -almi i]]-Norn-t-BOC-A-219780 magul, (0,02 g, 8 millimol, u 0. fejezetben leírtak szer in! olűálífva), majd 2% ani/.olf tartalmazó vízmentes Irifluor-ecolsavat (90 ml). A keverékei. - amely mintegy 2 porc alatt oldattá alakul - nitrogénatmoszféra alatt 10 porcig keverjük. Az oldatot csökkentett nyomáson 40 °C-on szárazra párolva gumiszerű szilárd anyagot kapunk, melyet dietil-éler/dikiór-melán (4:1) . eleggyel

(2 x 100 ml) oldörzsölünk. A szilárd anyagot szűréssel összegyűjtve és clielil-étorrel mosva friflwor-ecotsav«:, sót kapunk. Az utóbbit vízben (90 mi) oldjuk és az oldat pll-jál piridinnel 5,1-re állítjuk bo. Bzulán az oldatot liofilizálva 6,1 g sárgásfehér anyagot, kajáink.

A liufilizájl, anyagul, metanolban (39 ml) oldjuk és fordított fázisú fizilikagél/Cjd oszlopon (Waters Associates, Prep 900) tisztítjuk, 0,lÜ pir idiuium-acefálot tartalmazó léptsós gradienssel (lhO/ClbOH/CibCN, '1:1:2; 2:1:2 éri 1:2:2 arányi eluáljuk és 250 mi-ős frake-ióikal. gyűjtünk. A kívánt lennék a 2:1:2 arányú eleggyel eluálódik. A terméket tartalmazó frakciókat liofilizálva 2,23 g krémszínű Nn ,i-I N- (n-de kanod)-! ,-fenil-alanil J-A-21978C magot kapunk [fi általános kóplutű vogyülot: K ~ N-(ri-dekanoil)-l,-fenil-alanil; IP = II].

A S.érmékét analitikai fíPLO-vel (fordított rázinú szilikagr'd/CiR oszlop, McOtt/CIbCN/ IbO/PÍOAe (19:39:'1'J: 1) oldószer és 230 nm-nél UV detektálás], TI,C-vol [fordított fázisú szilikagél/Cm lemezek (Whatman), IbO/CIbOÍ!/ ClbCN (3:3:'1) oidéiszer, Van Urk-pormctozö

reagens és rövidhullámú l/V detektálás] és bioau lográfiávnl [szilikngél TLC (Merek), IhO/ClbCN/ncelun (!:2:2) oldószer, Micrococcus íulcus detektáló mikroorganizmus] értékeljük. Mindegyik eljárás a tennék homogén voltát mutatja ki. Az N-lonnináiis tripláién szubsztituensét 360 Mllz-en PMR-rel (proton-mágne.ses rozonnnc.iu) igazoljuk. Aminosav-unalizis alapján megállapithafó, hogy n termék be l ekvivalens L-fenil-alanin épült be.

ft. j>éida

A következő eljárás egyéb 9 általános képleté \ogyülr:lok clőáilitását illusztrálja. Az eljárássá’ előállított specifikus 5 általános kóplotű vegyülolckbon K jelentése p(n-dodocil-oxi)-beiizoil)-csoport és IP l-BOO csoportot vagy hidrogénatomot jelent.

A, Nrt t>-j>-{ ti-Dodfícil-vxi)-bon zoil-Norn~l-IIOC-A-2JÍI78C mag ülőűltlLnrni

p-(n- Dodecil-oxi)-bérizuil~2,'1,5-triklór-fenolálol (0,9 g, 1 mól) és A-2I978C l-BOC magot (0,9 g, 1 mol) AQ0 rn! vizmenl.es DMK-buu oldunk és az oldatot szobnhőméruéklelon, nitrogénalmoszférn alatt 120 óráig keverjük. Az oldószert csökkenteti, nyomáson leporoljuk. A ii nradékot dietil-éter ('100 ml) és kloroform (100 ml) elegyével 2 órán ál keverjük. A terméket szűréssel elválasztva és szárítva vílígosborna port (0,962 g) kapunk. Az anyag egy részét (0,78 g) metanolban (200 ml) oldjuk és proparal.lv HPLC-vel tisztítjuk, „Prop LC/Systom 500" egységet (Waters Ass jciat.es, Irres., Mil-ford, Mass.) és . álló fáziskén'. Prep Pak-500/Cio oszlopul (Waters Assiciutcs) használva. Az oszlopul izokralikusan Hunijuk vlz/motanol/acetonitril (2:1:2) oldöszerrondszerrel és 290 nd-es frakciókat gyűjtünk (1 frakció per perc). A kívánt vegyülctcf a 2-C. frakcióiban eluáljuk.

A fr ikciókat TLC [fordított, fázisú szilikagél/Cm, kifejlesztve viz/metanol/acetonit.r il (3:3:4) eleggyel, Van Urk-permolozó reagenssel dole. Utálva! alapján egyesítjük. Az egyesített frakciók bioautográfiá ja [szilikngél TbC-l, acctonii.ril/acolon/viz (2:2:1) oldószert és Staphylococcus aureus detektáló mikroorganizmust használva] azt. mutatja, hogy a termék egyetlen bioaktiv komponensből áll. Az eljárással 0,121 NTn>-p-{ri-dodcoil-oxi)bonzoii- Nor»-l-BOC-A-2I978C magot kapunk.

B. Nrr,>-p-(n-dodecil-oxi)-ben zoil-A-2í 97,S'C

mng clőúllilöttn

N'rrp-|)-(n-Dodec.il-uxi)-beiizoil-Norn-t-BOC-A-21978C magot (230 mg) 2% anizolt turtulmazó 9 ml trifluor-ecolrmvban oldunk és 5 percig 0 "C-on keverjük. Az oldat bopárlása után kapott olajat KLÓ-vu! (100 ml) eldörzsőljük. A szilárd anyagot olk ülő ní fjük,

5

10

15

20

25

30

35

<10

<15

50

55

G0

65

17