195839. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-21978 C jelzésű ciklusos peptid származékok előállítására
27 195839 28 ció végét jelezve. Ennek ellenerő a reakciót még 90 porcig folytatjuk a teljen átalakulás biztosítása céljából. 2 órai roagáltatás utón a képződött anyagot azonnal liofilizálva 12,7 g Norn-t-llOC-A-21978C Ci és Cb faktort kapunk. Hasonló eljárást alkalmazva kél 10 g-os és egy 30 g-os reakciót is indítunk. Ezeknél a reakcióidő csak 40 perc. A két 10 g-os kísérletből 11,9 illetve 12,1 g terméket kupunk. A 30 g-os reakció 39,1 g terméket eredményez. Az c, lóéi Ütött Nom-L-BOC-A-21978C C faktor nálriumsójáriak UV-spoklruma: Xm ü: 39900) és Á2i;o (í; 7400). '1. példa A-21978C Nom-t-BOC mag előállítása A. A. utaíiensis fermentációja Az A. utalionsis fermentációját az 1. példa A. fejezetében leírtak Bzorínt hajtjuk végre, ferde A. táptalajt és I. szaporító táptalajt használva és a szaporító táptalajt mintegy 06 óráig inkubáiva. b. Nom-l-noc komplex dezncilezése Az A-21978C Nom-l-BOO komplexet (1180 g nyers szubsz.trát, moly körülbelül 176 g U-21978C komplexet tartalmaz) hozzáadjuk a fermentációs közoghoz. A dezacilczést az 1. példa B. fejezőkében loírtak szerint hajtjuk végre. MPEG elemzéssel kimutatva a dozacilozés körülbelül 24 óra alatt teljes. G. A-21978C Norn-l-llOC mag izolálása A B. fejezetben leírtak szerint kopott ferment levet (100 1) szűrési segédanyaggal (Hyflo Super-Col) átszűrjük. A szűrlotel 7,6 liter gyantát (DIAION) tartalmazó oszlopon bocsátjuk át; az oszlopot vízzel (38 liter) mossuk. Az olúeiól szilikagél/Cia HPLC-vo! ellenőrizzük 264 mn hullámhosszon UV deteklá lássál. Kevés mag a mosói oly adók kai oluálódik. A magot ezután a következő víz/acotoiiiti-ii elegyekkol eluóljuk: (95:6) - 40 liter; (9:1) - 40 liter; én (85:16) - 100 liter. Ä magot tartalmazó frakciókul egyesítjük, vákuumban bepároljuk ás fagyasztva szárítjuk. 298,5 g félig tisztított A-21978C Norn-t-BOC-mng kapuid',. 1). Az A-21978C Norn-t-IiOC mag tisztítása A C. fejezetben loírtak szerint kapott, félig tisztított A-2I978C Nom-t-BOC magot (30 g) 0,27. ecotsnvat és 0,8% piridint tartalmazó víz/acolonitril elegybon (9:1) (75 ml) oldjuk. Az oldatot 3,33 liter Bzilikagél (Quantum hl’-D/Cm töltetet tartalmazó, a fenti oldószer-rendszőrrel kiegyensúlyozott 4,7 x 192 cm-es acéloszlopra visszük fel. Az oszlopot nyomás alatt 0,2% ccotsaval és 0,8% pis-idiril tartalmazó IhO/ClbCN/ClbOH elegygyel (80:15:6) oluáljuk. 350 ml-nél frakciókat gyűjtünk és a terméket 280 run-nél UV detektorral detektáljuk. A terméket tartalmazó frakciókaL egyesítjük, az oldószer eltávolítása céljából vákuumban bcpáruljuk és gyorshűtéssel szárítjuk. 18,4 g tisztított A-21978C No/n-l-BOC magot kapunk. 5. példa Az A-21978C Nom-t-BOC mag alternatív tisztítása A 4. példa C. fejezetében loírtak szerint kapott, félig tisztított A-2Í978C Norn-l-BOC magot (10,8 g) vízben oldjuk és 80 ml Amberlite 1KA-G8 gyantát (acetál-ciklus) tartalmaié oszlopra visszük fel. Az oszlopot vízzel mossuk és 5 iid/min áramlási sebességgel, egymás után 0,05n ooelsavoldallal (1080 ml), 0,111 ecetsavoldattal (840 ml) és 0,2n ecctsavold; ttul (3120 ml) oluáljuk, 120 ml-cs frakciókat gyűjtve. Az oszlop olúciójál unulítikui HPLC-vel szilikagél/Cio tölteten, 0,2% íuiiiiiúniun-acotatot tartalmazó víz/acctonitril/metanol (80:15:5) oldószerrendszorl használvu ellenőrizzük cs a terméket 254 nm-nél UV-iiionito'Tul detektáljuk. A terméket tartalmazó frakciókul egyesítjük; az óidul pll-ját piridinnel 5,8-ra állítjuk be; a kapott oldatot vákuumban mintegy 200 ml térfogatra bopároljuk. A Koncentrálumboz vizel, udunk és a képződött oldatot a piridin el Iá volitása céljából ismét koncentráljuk. A maradékból fagyasztó szárítással 3,46 g tisztított A-21078C Norn- l-ÜOC magot kapunk. 6. példa A kővetkező folyamai a 4 általános képlel.ü v egy ülőink „aktív észter" eljárással történő előállítását mutatja be. Az eljárás szerinl >lyan specifikus 4 általános képlelű vegyüli tokot állítunk elő, ahol K jelentése Clla/t Ib/sCO- (n-dekanoij) csoport, IV hidrogénatomot és R2 t-BOC csoportot vagy hidrogénatomot jelent, R-1, R1 és Rs jelentése hidrogénatom. N■ n<~ ( n-Dchanoil)-A-21978C mag A. 2,1,!)-Triklór-fenil-n-daktinoú t előállítása Di knnoil-klorid (Pfallz és Bauer, 5,6 ml) és 2,4,5-lriklór-fonol (5,6 g) diotíl-éterrel (1 liter) és piridinnel (120 ml) készült oldatát 4 óráig keverjük. A reakcióelogyct szűrjük cs vákuumban szárítjuk. A 2,4,5-triklór-fenil-n-dokanoátot szilikugéloszlopon (Woelm) tisz-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 G5 15
