195827. lajstromszámú szabadalom • Eljárás acilezett foszfolipidek elválasztására, az ilyeneket tartalmazó foszfatidilkolin termékekből
4 195827 5 különleges előnye a találmány szerinti eljárásnak az, hogy a kovasavgélt a kromatografálás után újból fel lehet használni. Az őszszes szennyezést, illetve elkülönítendő kíséröanyagot már az előfrakcióban felfogjuk, a főfrakció után már csak csekély mennyiségű foszfatidil-kolin marad vissza. A kovasavgél további előnye abból áll, hogy ez a szorpciós anyag erősen terhelhető. Így oszlop-kromatográfiás szétválasztásnál 100 rész kovasavgéllel körülbelül 60 rész szilárdanyagol lehet az alkoholban oldható kiindulási anyagból eltávolítani. A találmány szerinti eljárásnak végül az is az előnye, hogy még akkor is nagytisztaságú foszfatidil-kolin nyerhető, ha az acilezésnél a foszfatidil-etanol-aminnak nem teljes mennyiségét acilezték és/vagy az acilezésnél kapott termék még mono-, di- és/vagy triglicerideket (olaj) tartalmaz. Ezek a kísérőanyagok is tökéletesen elkülöníthetők a találmány szerinti eljárással a foszfatidil-kolinból és az előfrakcióban halmozódnak fel, ennek megnövelése nélkül. Példák Analízis A foszfatidokat vékonyréteg-kromatográfiás úton elemeztük. Az olajtartalmat a dializálható termékkel tettük egyéniévé. A vizet Karl Fischer szerint és a maradék etanolt gázkromatográfiásán határoztuk meg. Oszlopkromatográfia Kettős köpenyű kromatografáló oszlopot használtunk (belső átmérő 4,5 cm, magasság 37 cm). Az oszlop elő hökicserélől kapcsoltunk, hogy az oszlop és a felhordási hőmérséklet azonos legyen. Az oszlopot 200 g, a mindenkori oldószerben szuszpendált kovasavgéllel (Merck) töltöttük meg. Ismételt kromatografálás után a kovasavgél újból felhasználható. Kiindulási anyag Kiindulási anyagként szója-nyersfoszfatidot használtunk, amelyben 20 tX PC, 14 tX foszfatidil-etanol-amin (PE) és 30 tX olaj volt. 1. példa 400 g nyersfoszfatidot 24 g ecetsavanhidriddel, egy órán át, 50 °C-on keverünk. Ezután az illő alkotókat vákuumban, forgólepárlón ledesztilláljuk. A maradékot 50 °C-on 800 g 95 tf%-os etanollal extraháljuk. A keveréket szobahőmérsékletre hütjük és az átlátszó etanolos felső fázist elkülönítjük. Az etanolt vákuumban ledesztilléljuk. A maradékot (92 g) analizáljuk: foszfatidil-kolin (PC) 40 tX, foszfatidil-etanol-amin (PE) 1 IX, N-acetil-PE 12 t%, olaj 20 tX, egyéb 27 tX. 2. példa 08zlopkromalografálunk 65 °C-on: oszlopfeltöltés: 90 g 1. példa szerinti szilárd anyag 810 g 95 tfX-os etanolban eluálószer: 95 tfX-os etanol 4 liter eluétumhoz 1,4 liter előfrakció után összesen 2,6 liter maradék frakciót fogunk fel. A maradék frakciót bepároljuk és elemezzük: szilár danyag-kitermelés: 19 tX-a az elméletinek PC-tartalom: 93 tX PE-tartalom: kisebb mint 1 IX N-acetil-PE tartalom: kisebb mint 1 tx olaj-tartalom: PC kitermelés a kiindulási szilárdanyagkisebb mint 1 tx ra vonatkoztatva: 44 tX-a az elméletinek. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás acilezett foszfolipidek elkülönítésére legfeljebb 20 tömegszázalék acilezett foszfolipidet tartalmazó foszfatidil-kolin termékekből, azzal jellemezve, hogy a foszfatidil-kolin terméket, az adott esetben jelenlevő oldhatatlan alkotók elkülönítése mellett 1-4 szénalomos alkanolban, ami legfeljebb 15 térfogatszázalék vizet tartalmazhat, oldjuk, ezt az oldatot 60-90 °C hőmérséklettartományban kovasavgél-oszlopra visszük, az oszlopot ezen a hőmérsékleten - adott esetben legfeljebb 15 térfogatszázalék vizet tartalmazó -1-4 szénatomos alkanollal eluáljuk és ennek során összegyűjtjük az elkülönítendő terméket tartalmazó előfrakciól, valamint ettől elkülönítetten a tiszta foszfalidil-kolint tartalmazó fófrakciót és ebből az oldószert szokásos módon eltávolítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tisztítandó foszfatidil-kolin-termék oldatát a kovasavgél-oszlopra 60- -70 °C hőmérsékleten visszük fel és az eluálást is ugyanezen hőmérséklettartományban hajtjuk végre. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tisztítandó ÍJ 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
