195819. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-furil-butirolakton származékok és a fenti vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
19 195819 20 Az anyagól 1 : 1 térfogalarányú etil — -acetét-kloroform elegyből átkristélyositva 3,21 g (31,3%) tiszta terméket kapunk, hoszszú fehér tűs kristályok formájában, olvadáspontja 105-106,5 °C. Elemanalízis eredmények a CjtHjiNOio összegképlet alapján: számított: CX = 51,84, HX = 5,00, NX = 2,24, OX = 40,92; talált: CX = 51,98, HX = 5,12, NX = 2,08, OX = 40,63. A vegyület röntgen-diffrakciós vizsgálata a (3) képletű szerkezetet valószínűsíti, és 2 : 1 arányú 2-furil-butirolakton-N-metil-szukcinimid molekulakomplex jelenlétére utal az elemi cellában. A fenti módon előállított vegyülelet 2,38 mmól hidrogén-karbonáttal pufferolt 0,85X-os sósavoldatban oldva (4) képletű vegyületet és N-metil-szukcinimidet kapunk. 4. példa Az 1. példa szerint előállított vegyület LDso értéket egyszeri adagolás mellett 5 '’i'TIU./li egértörzsön határoztuk meg Spearman és Karber (Basic Exercises in Immunocheminlry, 1979) módszere szerint. A módszer elve, hogy csoportonként 10 egérnek 0,5 ml térfogatban adagoltuk az egyes dózisokat, 3 nap múlva meghatároztuk a túlélő állatok számát és az LDso értéket az alábbi képlet szerint számítottuk ki: log LDso = log (legmagasabb vizsgált dózia)+ + (log D) x (1/2 - R/N), a képletben D a dózisok hányadosát, R az összes elpusztult állatok számát, N az összes vizsgált állatok számát jelenti. Az eredményeket az 1. táblázatban adjuk meglő 15 20 j. táblázni Az 1. példa szerinti vegyület egyszeri i.p. LDso értékének meghatározása C57BL/6 egértörzzsel Vegyület dózisa Halolt állatok száma a 3. napon 272 mg/17 g-os egér (16,000 mg/kg) 10 136 mg/17 g-os egér ( 8,000 mg/kg) 10 68 mg/17 g-os egér ( 4,000 mg/kg) 7 34 mg/17 g-os egér ( 2,000 mg/kg) 0 17 mg/17 g-os egér ( 1,000 mg/kg) 0 LDso = 59,2 mg/17 g-os egér = 3,480 mg/kg A tisztított 1. példa szerinti vegyület LDso értéke egyszeri i.p. injektálás esetén C57BL/6 egérben 3 g/kg-nél nagyobb volt. 5 5. példa Az 1. példa szerint előállított vegyület LDjo értékét egyszeri orális adagolás esetén is meghatároztuk, CD-I egereken és CD patkányokon (CharleB River U.K. Ltd.). A vizsgálat elve, hogy a vizsgálandó vegyületet 5 g/kg dózisban 0,85X nátrium-kloridot tartalmazó 0,0238 mól/l-es hidrogén-karbonát-pufferoldatban (pH = 6,8) oldjuk, és az oldatot 10 ml/kg állandó dózistérfogatban orálisan adagoljuk az állatoknak. A pufferben oldott 1. példa szerint előállított vegyület, illetve maga a puffer orális beadása után 14 nap múlva az egereket illetve patkányokat leéljük, és nekroszkópiás vizsgálattal megjq állapítjuk a szembetűnő toxikus tüneteket. A vizsgálat során nem tapasztaltunk sem pusztulást, sem toxikus tüneteket, amiből arra következtethetünk, hogy az 1. példa szerint előállított vegyület LDso értéke egyszeri orális adagolás esetén 5 g/kg-nál nagyobb. 6. példu 50 C57BL/6, illetve BDFi törzsbe tartozó egereket 7 napon át intraperitoneálisan 25, 50, 100, 200 vagy 400 mg/kg dózisú 1. példa szerint előállított vegyülettel, illetve pufferrel kezelünk. A 8. napon limfocita-stimuláf,f, lási vizsgálatot végzünk. Az eredményeket a 2A. és 2B. táblázatban adjuk meg. 11
