195537. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás antraciklin-származékok előállítására
1 195 537 2 azt jelenti, hogy mindkét cukor építőelem, a dezoxifukóz és a cinerulóz B a szokásos glikozidos kötés mellett még egy éterkötéssel is kötődik. A találmány szerinti eljárást úgy végzik, hogy valamely (II) általános képletü vegyületet — a képletben R jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport és R3 jelentése a következő összetételű cukorkombinációk valamelyike :- Roa-dF-Rod — Roa-Rod-Rod A találmány tárgya eljárás az (1) általános képletö vegyületek mikrobiológiai előállítására — a képletben R jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcsoport és R1 jelentése a következő összetételű cukorkombinációk valamelyike: Roa-Rod-Rod vagy Roa-Rod-Acu, R2 jelentése a következő összetételű cukorkombinációk valamelyike: — Roa-dF = CinB — Roa-Rod-Acu — Roa-dF-CinA — Roa-Rod-CinA amelyekben a rövidítések jelentése a következő: Roa: rodozamin, dF: dezoxi-fukóz, Rod: rodinóz, Acu: akulóz, CinA: cinerulóz A és CinB: cinerulóz B és dF = CinB azt jelentik, hogy mindkét cukormolekula alkotó, vagyis a dezoxi-fukóz és a cinerulóz B, a szokásos glikozidos kötés mellett még éteres kötéssel is kapcsolódik — azzal jellemezve, hogy egy (II) általános képletü vegyületet — a képletben R jelentése az (I) általános képletnél már megadott és R3 jelentése a következő összetételű cukorkombinációk valamelyike: — Roa-dF-Rod vagy — Roa-Rod-Rod és R4 jelentése a következő összetételű cukorkombinációk valamelyike — Roa-dF-Rod — Roa-dF-Cin A — Roa-Rod-Rod vagy — Roa-Rod-CinA — átalakítunk egy specifikus oxjd-reduktázzal, és a reakcióközegből a keletkezett vegyületet ismert módon, extrakcióval elválasztjuk és tisztítjuk. A cukorkombinációkat az (l)-(6) képletek mutatják be. Már ismert a terminális cukormolekuláknak az oxidoreduktázzal végzett oxidációja antraciklin-triglikozidokká. [A. Yoshímoto, The Journal of Antibiotics Vol. XXXI1.472 (1979)]. Ebben az irodalomban egy, az egyik oldalon triglikoziddal helyettesített antraciklin-származékról van szó. Meglepő módon ebben az eljárásban azonban mégis lehetséges a molekulában két triglikozid láncot tartalmazó antraciklin-származékoknál a terminális cukormolekulák szelektív oxidációja. így például a (II) általános képletü citorhodinnak — a képletben R, R3 és R4 jelentése a már megadott - a Streptomyccs galileus (ATCC 31133) tenyészet szűrletéből előállított és R4 jelentése a következő összetételű cukorkombinációk valamelyike: — Roa-dF-Rod — Roa-dF-CinA 5 — Roa-Rod-Rod vagy — Roa-Rod-CinA -átalakítanak egy Streptomyccs purpurascens. vagy Streptomyces galilaeus eredetű specifikus oxidoreduktázzal, és a keletkezett vegyületet, illetve vegyületeket a reakcióid közegből extrakcióval elválasztják és tisztítják. 15 oxidoreduktáz készítménnyel végzett átalakításában csak az egyik triglikozid-oldallánc oxidálódik (R3): Oxidoreduktázként megfelelőek az olyan oxidáló 2o enzimek és enzim-készítmények, amelyeket a Streptomyces galileus vagy — purpurascens fajba tartozó mikrooiganizmusok, előnyösen Streptomyces purpurascens (DSM 1658) vagy Streptomyces galilaeus (ATCC 31133) tenyészetének szűrletéből a szokásos módon elválasz- 25 lunk‘ A találmány szerinti enzimes eljárást 20—45 C, előnyösen 37 °C hőmérsékleten és 4—7 pH, előnyösen 5 -6 pH-jú közegben folytatjuk le. A reakcióidő tarthat néhány órától 3 napig. 30 A kitermelés növelése érdekében további enzimet adagolhatunk a rendszerhez. A reakció lezajlása után a kívánt vegyületeket a reakcióközegből extrakcióval elválasztjuk és adott esetben oszlopkromatógráfiával, előnyösen szilikagélen vagy kémiailag kötött fordított 35 fázison (,,reversed-phase”-adszorbenseken) vagy cseppellenáramú kromatográfiával elválasztjuk és tisztítjuk. A találmány szerinti eljárással például a következő vegyületeket állítjuk elő: Citorhodin U (az (I) általános képletü vegyület, a kép- 40 leiben R1 jelentése Roa-Rod-Rod és R2 jelentése -Roa-dF = CinB); Citorhodin V (az (I) általános képletü vegyület, a képletben R1 jelentése -Roa-Rod-Rod és R2 jelentése -Roa-Rod-Acu); 45 Citorhodin P (az (I) általános képletü vegyület, a képletben R1 jelentése -Roa-Rod-Acu és R2 jelentése -Roa-dF-CinA); Citorhodin D (az (I) általános képletü vegyület — a képletben R1 jelentése -Roa-Rod-Acu és R2 50 jelentése -Roa-dF = CinB); I -hidroxi-citorhodin V 1-hidroxi-citorhodin P 1-hidroxi-citorhodin D c,- 1-hidroxi-citorhodin B (az (I) általános képletü vegyü'■*>J let — a képletben R1 jelentése -Roa-Rod-Rod és R2 jelentése -Roa-dF-CinA). A találmány szerinti citorhodint erős citosztatikus hatás jellemzi. A (II) általános képletü kiindulási vegyü- U letet — a képletben R jelentése hidrogénatom, R3 és R4 jelentése a már megadott — a 33 23 025 számú NSZK- beli közzétételi irat szerint Streptomyces purpurascens (DMS 2658) mikroorganizmussal végzett fermentációval, 65 és az ezt követő elválasztással állítjuk elő, 2
