195523. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hialuronsav frakciók és ilyen terméket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 I95 523 2 A találmány a hialuronsav (a továbbiakban röviden „HA”) speciális molekulatömegű frakcióinak előállítására vonatkozik, amelyek a gyógyászatban alkalmazhatók, és nem rendelkeznek nemkívánatos gyulladáskeltő hatással. Az egyik, a találmány szerint előállítható HA frakció a sebgyógyulást segíti elő, míg a második HA frakció intraokulárisan, az endobulbáris folyadékok helyettesítésére használható, vagy intraartikuláris injekció formájában sérült csontízületek kezelésére használható. A HA frakciók ezenkívül szemészeti készítmények vivőanyagaként is felhasználható, és ebben az esetben egyrészt a szaruhártyahdmmal összeférhető készítmények előállítását teszik lehetővé, másrészt fokozzák a szemészeti készítmények aktivitását. A hialuronsav a természetben előforduló heteropoliszaharid, amely váltakozó D-glükuronsav és N-acetil-D- glükozamin maradék egységekből épül fel. A HA lineáris, nagy — általában 8 és 13 millió közötti — molekulatömegű polimer, és a sejthártyában, az emlősök kötőszövetének extracellulárís alapanyagában, a szem endobulbáris folyadékában, az emberi köldökzsinór szövetében és a kakastaréjban fordul elő. A HA felhasználásával kapcsolatos korábbi vizsgálatok eredményei mcgtalálhatól a 4 141 973 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban, amely a HA-nak, egy az endobulbáris folyadék helyettesítésére alkalmas, és más gyógyászati célokra is felhasználható frakciójával foglalkozik. Ez a szabadalmi leírás azonban speciálisan egy 750 000-nél, előnyösen 1 200 000-néI nagyobb molekulatömegű HA frakcióra vonatkozik, és megállapítja, hogy a 750 000-nél kisebb molekulatömegű HA-frakciók gyulladáskeltő hatásuk következtében nem alkalmazhatók gyógyászati célra. Ezért a szabadalmi leírás szerint ezeket a kisebb molekulatömegű frakciókat döntik. Ez azonban azt eredményezi, hogy a szövetekből hozzáférhető HA teljes mennyiségének mintegy 90%-a elvész, és a rendelkezésre álló HA-nak csak kis része (körülbelül 10%-a) hasznosul. Az említett amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás kitanításával ellentétben azt találtuk, hogy a HA kisebb molekulatömegű frakciói is rendelkeznek hasznos gyógyászati aktivitással. Így a találmány szerint a különböző forrásokból hozzáférhető HA-nak mintegy 80%-a hasznosítható. Közelebbről, találtunk egy, a sebgyógyulást elősegítő HA-frakciót, és egy második, a szem endobulbáris folyadékának helyettesítésére adott intraokuláris injekció, illetve sérült ízületek kezelésére alkalmazott intraartikuláris injekció céljára alkalmas HA frakciót. A hialuronsav általunk hasznosított, különböző frakcióit az 1. ábrán szemléltetjük. Mint már említettük, az eddigi vizsgálatok, amint az idézett szabadalmi leírás is szemlélteti, a hialuronsav nagy, 750 000-nél nagyobb molekulatömegű frakcióinak felhasználására irányultak, Találmányunk szerint két új HA-frakciót izoláltunk, amelyek közül az egyik kis molekulatömegű, a másik pedig közepes tartományt átölelő, átlagos molekulatömegű frakció. A frakciók nagytisztaságúak, és így lényegében tisztának tekinthetők, és nem mutatnak gyulladáskeltő hatást. Ezek a HA-frakciók különböző, a hialuronsavat kinyerhető mennyiségben tartalmazó kötőszövetekből különíthetők el. A találmány szerint a frakciókat molekulaszűrési technikával különböztetjük meg és különítjük cl. Az első, általunk izolált frakciót Hyalastine-nek neveztük. A frakció átlagos molekulatömege körülbelül 2 50 000 és 100 000 között van. Ez a Hyalastine frakció sebgyógyulást elősegítő hatása miatt állat- és embergyógyászati célokra egyaránt alkalmasnak mutatkozott. A második, találmány szerinti frakciót Hyalectin-nek neveztük. A második frakció átlagos molekulatömege mintegy 500 000 és 730 000 között van. A Hyalectin frakció a szemsebészetben alkalmazható az endobulbáris folyadék helyettesítésére, és felhasználható a humán- és állatgyógyászatban egyaránt ízületek baleseti és degeneratív sérüléseinek gyógyításában. A Ilynlastin akár intradermális injekció, akár a sebgyógyulást elősegítő, helyileg alkalmazható gyógyszerkészítmény formájában használható fel. A Hyalectin pedig intraokuláris vagy intraartikuláris injekció céljára használható fel. Találmányunk kidolgozása során alaposan, a korábbiaknál lényegesen nagyobb pontossággal tanulmányoztuk a különböző Ha frakciókat, és meghatároztuk, melyek a HA gyógyászatdag alkalmazható, illetve gyulladáskeltő hatásuk miätt gyógyászati célokra nem alkalmas frakciói. A HA-frakcióknak két specifikus jellemzőjét, nevezetesen a sejt-mobilizáló aktivitást és a belső viszkozitást azonosítottuk és vizsgáltuk. Az állatok sebgyógyulási folyamatát előmozdítja a cclhiiáris mobilizáció, különösen a kötőszöveti sejtek mobilitása. Másrészt, a sejtmobilizációs vagy proiiferációs aktivitás (azaz mitózis) elkerülendő a szemgolyón belüli műtétek esetében. Ez különösen igaz a retina leválás korrigálására végzett műtétek esetében, ahol a túl gyors sebgyógyulás káros hatásokkal járhat. A belső viszkozitás szintén fontos paraméter egy HA frakció aktivitásának meghatározásakor. Egy nagy belső viszkozitású frakció alkalmas sebészeti célokra, traumás vagy degeneratív természetű ízületi betegségek gyógyításában, és az endobulbáris folyadék helyettesítésére. Másrészről, a nagy viszkozitás a sebgyógyulás elősegítésére alkalmazni kívánt frakciók esetében nemkívánatos jellemző. A sebgyógyítasban alkalmazni kívánt frakcióknak alacsony viszkozitásúaknak kell lenniük, hogy a gyakorlatban könnyebben felhasználhatók legyenek. A találmány szerint előállított Hyalastine frakcióról megállapítottuk, hogy jó mobilitással vagy sejtproliferációs aktivitással rendelkezik, és alacsony viszkozitású. Ennek megfelelően a Hyalastine rendelkezik a sebgyógyulást elősegítő anyagoktól megkívánt tulajdonságokkal. Ugyanezen tulajdonságok miatt nemkívánatos a Hyalastine frakció felhasználása intraokuláris vagy intraartikuláris injekciós kezelésekben. A találmány szerint elkülönített és azonosított Hyalectin frakció elhany ago Iható sejtmobilitással és proiiferációs aktivitással rendelkezik, ugyanakkor nagy viszkozitású. Ezek a tulajdonságok a Hyalectin frakciót alkalmassá teszik intraokuláris és intraartikuláris injekciós kezelések céljára történő felhasználásra. Ugyanakkor a Hyalectin nem alkalmas a sebgyógyulás elősegítésére, snivel nem rendelkezik az ehhez szükséges sejtmobilizációs aktivitással. • A hialuronsav hasznos frakcióinak elkülönítésekor arra is tekintettel kell lenni, hogy a kapott frakciók ne endelkezzenek gyuiladáskeltő aktivitással. A korábban említett amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint annak érdekében, hogy gyuiladáskeltő hatástól mentes hialmoiKav-frakciókhoz jussunk, a 750 000-nél nagyobb molekulatömegű frakciókat kell elkülöníteni 5 10 15 2C 25 30 35 40 45 50 55 60 65
