195518. lajstromszámú szabadalom • Eljárás morfolinil-daunorubicin- és morfolinil-doxo-rubicin-származékok és analógjaik előállítására
1 195 513 2 14-hidroxil-csoportot visszanyerhetjük úgy, hogy savval, például ecetsawal vagy hideg vizes trifluor-ecetsawal kezeljük. A találmány további részleteit az alábbi példákkal szemléltetjük. 1. példa 3'-dezamino-3'-(4"-morfolinil)-5-iminodoxorubicin előállítása A) 0,396 g 3'-dezamino-3'-(4”-morfolinil)-doxorubicin 5 ml vízmentes piridinnel készített oldatához 0,990 g p-anizil-klór-difenil-metánt adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten sötétben reagáltatjuk körülbelül két napig. Az oldatot jeges vízzel lehűtjük és 0,5 ml metanolt adunk hozzá. Az elegyet 2 óra hosszat keverjük és hozzáadjuk 50 ml híg nátrium-hidrogén-karbonáthoz és diklórmetánnal extraháljuk. Az extraktumokat bepároljuk és gumiszerű maradékot kapunk, melyet feloldunk toluolban, bepároljuk, feloldjuk diklór-metánban és 35—60 °C-on forró petroíéter lassú hozzáadásával kicsapjuk. A csapadékot kinyerjük, diklór-metánban ismét feloldjuk és kicsapjuk petroíéter és dietil-éter 2 :1 arányú elegyével. (Vili) képletű 14-0-p-anizil-difenil-metil-3'dezamino-3'-(4’'-morfolinil)-doxorubicint kapunk amorf szilárd anyag formájában 94%-os termeléssel. Ezt az anyagot 90 MHz NMR-anqlízissel azonosítjuk CDCl3-ban. (B) 0,532 g 14-0-p-anizil-difenil-metil-3'-dezamino-3'(4'-morfolinil)-doxorubicjnt 10 ml diklór-metánnal készített oldatát hozzáadjuk ammóniával telített 30 ml metanolhoz 0 °C-on. Az elegyet 0 °C-on 1 óra hosszat keveijük, majd 3 °C-on 27 óra hosszat állni hagyjuk. A termékről az oldószert lepároljuk, a maradékot feloldjuk diklór-metanol 4 : l arányú elegyébcn és bepároljuk. Ezt a műveletet kétszer megismételjük és a szilárd anyagot diklór-metánban feloldjuk, Celiten leszűijük, koncentráljuk és diklór-metán és metanol 1 :2 arányú elegyében feloldjuk. Ismét koncentráljuk és szárítjuk. 0,52 g (97%) lilaszínű maradékot kapunk. C) A B) rész szerinti maradékot feloldjuk 2 ml diklórmetánban és 1,5X40 cm-es szilikagéloszlopra visszük és 50 ml diklór-metánnal, majd diklór-metán és metanol alábbi arányú elegyével eluáljuk: 99:1, 150 ml; 98:2, 150 ml; 97:3, 500 ml; 95 :5, 100 ml; 93:7, 100 ml és 90 :10, 200 ml. 565 ml eluálószer után 335 ml frakciót különítünk el, leszűrjük és bepároljuk és az alkalmazott mintának 59,9%-át tartalmazza egyetlen anyagként. Ez az anyag 14-0-p-anizi!-difenii-metil-3'-dezamino-3'(4M-morfolinil)-5-iminodoxorubicin a 90 MHz NMR- analízis szerint. D) A C) lépésből származó 0,341 g mintát feloldunk 20 ml 80%-os ecetsavban és az oldatot sötétben 7 óra hosszat keveijük. Az oldatot ezután 50 ml vízzel hígítjuk és háromszor extraháljuk kloroformmal. A vizes fázis tartalmazza a kívánt terméket és ezt sötétben liofilizáljuk, így 0,294 g terméket kapunk. A szilárd anyagot feloldjuk 0,1 n ecetsavban. Az oldatot kloroformmal mossuk, nátrium-hidrogén-karbonáttal meglúgosítjuk és kloroformmal extraháljuk. A kívánt termék átmegy a szerves fázisba és ezt mossuk, szárítjuk, leszűrjük és bepároljuk. Így maradékot kapunk, melyet feloldunk kloroform és metanol 1 :10 arányú elegyében, majd bepároljuk és szárítjuk. 0,228 g 3,-dezamino-3i-(4"-morfoli- 4 nil)-5-iminodoxorubicint kapunk. Áz anyagot 300 MHz NMR- és elemanalízissel azonosítjuk. 300 MHz NMR CLC13 : *15,66f (s, 11-OH), 13, 74 (d, 6—OH), 9,26 (d, =NH), 8,22 (d, 1-H), 7,73 (t, 2—II), 7,33 (d, 3—H), 5,72 (s, l'-H), 5,39 (s, 7-H), 4,94 (s-9-OH). 4,77 (s, 14-H2), 4 15 (s, OCH3), 3,98 (q, 5'—OH), 3,68 (m, 4-H, 2-H2, 6"-H2), 3,21 (d, 108-H), 3,04 (d, 10A-H), 3,01 (m, 3-OH), 2,65-2,30 (m, 3''-H2, 5"-H2), 2,40 (m, 88, -H), 2,10 (dd,8A-H). 2. példa Savaddíciós só előállítása Az 1. példa szerinti szabad bázis terméket 20 ml vízben sz.uszpcndáljuk. Az. elegyet keverjük és lassan hozzáadunk 3,2 ml 0,1 n sósavat és így a pH-t 4,5-re állítjuk. A szuszpendált szilárd anyag lassan feloldódik. Az oldatot liofilizáljuk sötétben és így a 3'-dezamino-3'-(4"morfolinil)-5-iminodoxorubicin-hidrok!orid savaddíciós sót kapjuk, több mint 97%-os tisztaságban a nagynyomású folyadékkromatográfia szerint. Analízis a C3iH36N2On • HC1- 2H20 képlet alapján: számított: C% 54,35; H% 6,03; Cl_% 5,17; N% 4,09; talált: C % 54,20; H % 5,96; Cl“% 4,33; N % 4,03. 3. példa 3 '- dezainino-3 '-(4”-morfolinil)-5-imino-13- dihidrodoxorubicin előállítása és izolálása A) 0.186 g 3’ dezamino-3'-(4"-morfolinil)-13-dihidrodoxorubicin 6 ml diklór-metán és metanol 1 :1 arányú elegyével készített oldatát 20 ml ammóniával telített metanolhoz adjuk 0 °C-on. Az elegyet 1 óra hosszat keverjük, majd 3 °C-on 27 óra hosszat tároljuk, bepároljuk és a maradékot feloldjuk diklór-metán és metanol 4:1 arányú elegyében és háromszor koncentráljuk, hogy az ammóniát teljesen eltávolítsuk. A kapott maradékot preparatív vékonyréteg-kromatográfiásan tisztítjuk 2 mmX 20 cmX 20 cm-es szilikagél-lemezeken és előhívószerként kloroform és metanol 9 :1 arányú elegyét használjuk. A lényegében tiszta 3'-dezamino-3 -(4 - morfolinil)-5-imino-13-dihidro-doxorubicint tartalmazó sávokat elkülönítjük, eluáljuk és az eluált anyagot megszárítva 0,139 g szabad bázist kapunk és a 300 MHz NMR-analizissel azonosítjuk. 300 MHz NMR COCl3: 15,80-15,81 (s, 11-OH), 13,63 (bs, 6-OH), 9,20 (bs, =NH), 8,21 (d, 1-H), 7,72 (t, 2—H), 7,32 (d, 3-H), 5,72 (s, l'-H), 5,39 (s, 7-H), 4,86-4,84 (s, 9-OH), 4,14 (s, OCH?), 4,11- 3,86 (m, 13—H), 4,07 (m, 5''-H), 3,92 (m, 4-H), 3.68 -3,53 (m, bs, 14-11), 3,68 (m, 2"-H2, 6"-II2), 2,77 (d, 10A-H), 3,25-3,21 (d, 108-H), 2,72-2,50 (m, 3'-H), 2,72-2,35 (m, 10A-H, 3”-H2), 1,95-1.68 (m, 2'—H;), 1,95-1,68 (m, 8A-H), 1,42-1,41 <d, 6'-H3). B) Az A) rész szerinti szabad bázist hidrokloriddá alakítjuk a 2. példában leírt módon.*A nagynyomású folyadék-kromatográfiás analízis szerint a hidroklorid tisztasága 97-98%. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
