195516. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sfingosin-származékok előállítására
1 195 51 rt 2 védjük meg, amelyek egy primer és szekunder hidroxilcsoport jelenlétében szelektíven az előbbivel reagálnak. R védőcsoportként különösen nagy térkitöltésű csoportok jönnek tekintetbe, pl. tercier butil-, trifenil-metil(tritil-), triklór-acetil-, trimetil-szilil-, tercier butil-dimetilszilil- vagy tercier butil-difenil-szilil-csoport. Különösen előnyösnek bizonyult a trifenÜ-metil-, monometoxi-trifenil-metil-, tercier butil-dimetil-szilil- és tercier butildifenil-szilil-csoport. Az R csoport bevitelét a szerves kémiából jól ismert módszerekkel, az adott védőcsoportnak megfelelő módon végezhetjük el. így pl. a trifenil-metil-csoportot a ceramid és a megfelelő halogenid (pl. trifenil-klórmetán vagy trifeníl-bróm-metán) reakciójával vihetjük be. A tercier butil-dimetil-szilil- és tercier butil-difenilszilil-csoport bevitele is a megfelelő halogeniddei (pl. kloriddal vagy bromiddal) történhet előnyösen. Az (A) eljárás-változat szerint az 1-helyzetben védett (HI)-D cs/vagy (Ill)-L általános képletű ccramidot a 3-hclyzelbcn egy Ac’Oll általános képlclű szerves karbonsavval vagy reakcióképes funkcionális származékával történő reagáltatással (IV)-D és/vagy (IV)-L általános képletö vegyületté alakítunk. A reakcióhoz elsősorban alifás vagy aromás karbonsavakat alkalmazhatunk; előnyösen használhatunk monociklikus aromás karbonsavakat (pl. benzoesavat vagy helyettesített benzoesavakat). Az Ac3OH általános képletű savakkal történő, az alábbiakban ismertetésre kerülő észterezéshez is a fenti karbonsavakat alkalmazhatjuk. Az A^OH illetve Ac3OH általános képletű karbonsavakkal vagy az Ac2OH általános képletű optikailag aktív szerves savakkal történő észterezésf Ullmann: „Enzycklopüdic der tcsclmischcn Chemie” c. művében [4. kiadás, 11. kötet, 91. oldalon kezdődő rész; Verlag Chemie, Weinheim, Német Szövetségi Köztársaság (1976)] ismertetett módszerekkel hajthatjuk végre. Előnyösen járhatunk el oly módon, hogy a megfelelő karbonsavhalogenidet tercier szerves bázis (pl. trictilamin, piridin vagy dimetil-anilin) jelenlétében, vízmentes szerves oldószerben (pl. benzolban, toluolban, tetrahidrofuránban, dietil-étérben vagy diklór-metánban) reagáltatjuk. A (B) eljárás-változat szerint az 1-helyzetben védett (III) általános képletű ceramidot a 3-helyzetben valamely egyszerű, optikailag aktív Ac2OH általános képletű szerves karbonsavval vagy reakcióképes funkcionális származékával egy (V) általános képletű vegyületté észterezzük. E célra előnyösen borkősavat, dibenzoil-borkősavat, mandulasavat, O-acetil-mandulasavat, kámforsavat, kámfor.-szulfonsavat vagy bróm-kámfor-szulfonsavat stb. alkalmazhatunk; különösen előnyösen O-acetilmandulasavat használhatunk. Az észterezést előnyösen egy karbonsav-halogeniddel, tercier szerves bázis (pl. piridin) jelenlétében, vízmentes szerves oldószerben (pl. benzol, toluol, tetrahidrofurán, dietil-éter vagy diklór-metán) végezhetjük el. Ezután az (V) általános képletű vegyületek diasztercomer keverékét kromatografálással ~ előnyösen kovasavgélen — vagy frakcionált kristályosítással szétválasztjuk. A (C) eljárás-változat szerint a (B) eljárás során kapott (V) általános képletö digsztereomereket az 3-0-acilcsoport (Ac2) bázissal katalizált lehasításáva! (előnyösen nátrium-metiláttal metanolban) az optikai antipódokká alakítjuk. A kapott optikai antipódokat Ac3OH általános 4 képletű egyszerű szerves karbonsavval vagy reakcióképes funkcionális származékával (VI) általános képletű vegyületekké észterezzük. E célra előnyösen aromás vagy alifás karbonsavakat alkalmazhatunk, különösen előnyösen aromás karbonsavakat (pl. benzoesavat vagy helyettesített benzoesavakat). Az (A), (B) és (C) eljárásnál kapott (IV), (V) illetve (VI) általános képletű vegyületekből az 1-helyzetű védőcsoport savas hidrolízissel történő eltávolításával (tritilvagy szilil-védőcsoportok) a megfelelő (VII), (VIII) illetve (IX) általános képletű vegyületeket állítjuk elő. A (VII), (Vili) illetve (iX) általános képletű vcgyilletct ezután olyan D-glükóz O-triklór- vagy O-trifluoracetimidáttal reagáltatjuk, amelynek hidroxilcsoportjai az I-helyzetű hidroxilcsoport kivételével Ac4 acilcsoportokka! védettek. A reakció során a megfelelő (X), (XI) illetve (XII) általános képletű vegyületet kapjuk. A (X) általános képletű vegyületek esetében a terméket diasztcrcomcrckrc szétválasztjuk; és a (X), (XI) illetve (XII) általános képletű vegyületekben lévő Ac1, Ac2, Ac3 és Ac4 acilcsoportokat bázis jelenlétében (előnyösen nátrium-metiláttal metanolban) egyidejűleg lehasítjuk. A farmakológiai kísérletek leírása 1. vizsgálat Patkányokat narkotizálunk és a szőrzetet eltávolítjuk. Az állatok törzsének mindkét oldalára 17 mp-ig 2 mm átmérőjű 270 °C-ra hevített fémkorongot nyomunk és ily módon égési sebeket okozunk. A glükosfingolipidct zselé-alapmass/.ába dolgozzuk be és a nyert kenőccsel a sebeket naponta kétszer bekenjük. Mérjük a sebek teljes gyógyulásáig eltelt időt. A glükosfingolipideket tartalmazó kenőcs alkalmazása esetén a gyógyulási idő 21 %-kal rövidebb, mint a kontroli-csoport esetében. 2. vizsgálat Minisertések hátán az 1. vizsgálatnál leírt módon 4—4 égési sebet idézünk elő és üreges hengeres fúróval 2,5 cm átmérőjű négy szúrt sebet ejtünk. A hatóanyagot a zseléalapmasszába bedolgozzuk és a sebeket a kenőccsel naponta kétszer bekenjük. Mérjük a sebek teljes gyógyulásáig eltelt időt. A sebek teljes gyógyulásához szükséges időt a glükosfingolipidek 18 %-ig terjedő mértékben megrövidítik. 3. vizsgálat Minisertéseken az 1. vizsgálatnál leírt módon égési sebeket idézünk elő. A sebeket naponta kezeljük. A 6., 12. 18. és 22. kezelési nap után a kezelt csoportból állatokat kiemelünk és narkózisban leölünk. A sebeket kivágjuk, felezzük és 4%-os pufferezett formalin-oldatban fixáljuk. A szövcldarabkákból 4 gin vastagságig hiszlológiai paraffinmetszeteket készítünk. Az alábbi paramétereket kvantitatíven meghatározzuk: 1. Az epitelizált sebfelület hossza; 2. a nem-epitelizált sebfeiület hossza; 3. az epidermisz Stratum bazalc hossza; 4. az újraképződött epidermisz felülete; 5. a szőrtüszők és faggyúmirigyek felülete. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
