195514. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a primicin (triamicin ?) antibiotikum-komplex feltárására
1 195 514 2 Kiértékelés: Shimadzu denzitométerrel. (Az adatok 6 párhuzamos mérés átlagai). A táblázat adatait értékelve, arra a következtetésre jutottunk, hogy az 1., 2. és 3. minta három biológiailag aktív főkomponensének (A^ A3, B^ %-összege jól egyezik az 5. minta megfelelő adatával. A 4. minta %-os összetételének adatai, azonos minőségi összetétel mellett, eltérőek az 1. minta adataitól. Míg az Aj főkomponens mennyisége az 1. és 3. minta 40-50%-os arányáról a 2. és 4. mintánál 30—35%-ra csökkent, addig a rosszabbul oldódó A3 komponens mennyisége 17—20%-ról 28— 30%-ra emelkedett. Az utóbbi feldúsulást a polárosabban oldhatóbb A t-főkomponens anyalúgban maradása okozhatja. Ezt fejezi ki például a 2. minta magasabb olvadáspontja is (202—206 °C). Megállapítható, hogy a triamicin-komponcnsck együtt kristályosodnak és oldhatósági viszonyaiktól függően stabil komplexet képeznek. Az Alt A3 és B, főkomponensekből álló triamicinkomplex összetétele megváltoztatható: a fermentációs körülmények, mint a táptalaj, tenyésztési idő és hőmérséklet, levegőztetés, stb. változtatásával, vagy a végtermék alkáli bontásával (pH = 10 felett), továbbá katalitikus hidrogénezésével (előnyösen Rancy-nikkellcl). A triamicin-komplex komponenseit mikropreparativ kromatográfiával szétválasztottuk és meghatároztuk antibiotikus aktivitásukat. E célból úgy járunk el, hogy a kezdetben vastag-, majd vékonyrétegen 18 cm-es csíkban felvitt anyagot többször kromatografáltuk, majd detektálás után a zónafrakciókat lekapartuk és ecetsavas metanollal eluáltuk. A rétegballaszt-anyagokat, melyek mintegy a százszorosát teszik ki a vizsgálandó antibiotikumnak, kétfázisú I. oldószerrendszerben megosztva eltávolítóttuk: az antibiotikum a felső-, a rétegballaszt az alsó fázisba került. Bacillus subtilis teszt-mikroorganizmussal, sorozathígítással mérve, a major-komponensek a következő biológiai aktivitást mutatták: Aj= 0,05 jug/ml, A3 = 0,03 Mg/ml, Bj = 0,20 jug/ml, A,A3 komponens kettős = 0,02 jug/ml, itt feltételezhető a komponensek közötti esetleges szinergizmus. A triamicin (primicin)-komplex a szokásos fizikaikémiai adatokon (oldhatóság, olvadáspont, UV-, 1R- színképek, elemi összetétel, egyenértéksúly stb.) kívül főként VRK-s összetételével (1. táblázat) és inC--MNR- spektrumával (2/a és 2/b ábra) jellemezhető. Gyakorlati hasznosításának alapját képezi, hogy nemcsak a más antibiotikumokra érzékeny mikroorganizmusokra, hanem az úgynevezett polirezisztens humánpatogén törzsekre Is hatásos, és önmagával szemben rezisztenciát még nem figyeltek meg. A polirezisztens humánpatogén törzsekre gyakorolt antibiotikus hatásának spektrumát a II. táblázat ismerteti. A triamicin-komplex rendkívül rossz oldhatósági viszonyai és adszorptív képessége révén a testszövetekből és a nyálkahártyáról nem szívódik fel, emiatt hangsúlyozottan alkalmazható lokálisan. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kivitelének részleteit a következő példák szemléltetik anélkül, hogy azokkal a találmányt korlátozni akarnánk. 4 II. táblázat A triamicin-komplex hatásspektruma polirezisztens humánpatogén mikroorganizmus törzsekre vonatkoztatva Humánpatogén polirezisztens törzsek MIC [/ig/ml] Bacillus subtilis ATCC.6633 Bacillus subtilis CCM. 1718 0,02 (-lactamase producing) 0,1 Bacillus cercus CCM.2010 Bacillus licheniformis CCM.2182 0,1 (-lactamase producing) Bacillus licheniformis CCM.2205 0,075 (-lactamase producing) 0,075 Staphylococcus aureus CCM.885 Staphylococcus aureus CCM.2317 0,25 human mastitis Staphylococcus aureus CCM.2514 0,1 (haemolysis) Staphylococcus aureus CCM.2515 0,25 (ocagulase pozitív) 0,25 Streptococcus faccalisCCM. 1875 0,5 Streptococcus agalactiae CCM.5534 0,5 Streptococcus dysgalactiae (= ATCC 9926) CCM.5548 0,5 Streptococcus agalactiae CCM.5153 (from the milk of cow with mastitis.) Mycobacterium tuberculosis typ. 0,5 hu.H37Rv. 0,05 Mycobacterium tuberculosis typ. bovin E5 0,8-1,0 Mycobacterium tuberculosis 607 0,5 Micrococcus flavus ATCC. 10240 0,075 ' Pseudomonas aeruginosa CCM. 1960 25 Pseudomonas fluorescens CCM.2115 25 Pseudomonas acidovorans CCM.283 25 Pseudomonas pictorum CCM. 284 10 Proteus vulgaris CCM.1799 25 Shigella sonnei CCM. 1373 25 Salmonella typlii-murium CCM.5445 Salmonella chloreae-suis Inst. 50 Pasteur strain CCM.5438 50 Escherichia coli DSM.30038 50 Escherichia haemolyticus CCM.5863 Escherichia coli (ATCC 11775, 50 cystitis) CCM.5172 Escherichia coli lysogenic, colicinogenic 50 CCM. 180 50 Escherichia coli OTK1 17963 25 Escherichia coli OTKI 23473 50 Klebsiella pneumoniae CCM. 1848 50 Serratia Marcescens CCM.303 25 Pasteurclla múltoddá CCM.5419 25 Vibrio parahaemolyticus CCM.5938 25 Candida albicans CBS 562 25 Candida tropicalis CBS 433 25 Candida pseudotropicalis 372 5 Candida krusei K-47 10 Cryptococcus ncoformans K-16 5 Saccharomyces ccrovisiac OKI 1282 10 MIC = minimal inhibitory concentration = minimális gátló koncentráció. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
