195484. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2,3,4,9-tetrahidro- 1H-karbazol- 1-ecetsavszármazékok és a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
5 195 484 6 elsődleges screenelésére használják. A vizsgálathoz 15— 25 g testtömegű Swiss törzsbe tartozó albino hím egereket alkalmazunk. Az állatokat a vizsgálatot megelőzően 18 órán át éheztetjük, de vizet ad libitum kapnak. A vizsgálandó szereket oldhatóságuknak megfelelően 0,5%-os metil-cellulózban vagy 0,5%-os Tween 80- ban oldjuk vagy szuszpendáljuk. Adagolásuk gyomormosással 5 ml/kg térfogatban történik. A vizsgálandó anyag elsődleges screenelésére valamennyi szert önkényesen megválasztott 200 mg/kg dózisban p.o. adagoljuk 10 főből álló csoportoknak. Siegmund és munkatársai (Proc. Soc. Exp. Bioi. Med., 9.5, 729—731 /1957/) módszerének módosított változatát alkalmazzuk. 5-5 egérből álló csoportoknak adagoljuk a vizsgálandó vegyületet vagy a hordozóanyag kontrollt. 60 perc múlva az állatoknak i. p. 0,02 %-os fenil-kinon oldatot (PBQ: 2-fenil-l ,4-benzokinon) injektálunk be 0,3 ml/20 testtömeg mennyiségben, és az állatokat egyenként megfigyelő ketrecekbe helyezzük. A következő 15 percben minden egyes egérnél számlájuk a vonaglások vagy a hasi görcsök számát. A vizsgálatot másik 5 egérből álló csoporttal megismételjük, és a 10 egérből álló csoportra kapott eredményekből átlagos vonaglás-számot számítunk. Összehasonlítjuk a vizsgálandó szerrel kezelt és a hordozóanyaggal kezelt csoportokat, kiszámítjuk, hogy a vizsgálandó anyag milyen mértékben védi az állatokat a vonagiástól. Eredményeinket %-os értékben adjuk meg. c jelentése a kontrollcsoportra számított átlagos vonaglások száma, t jelentése a vizsgálati csoportra vonatkoztatott átlagos vonaglások száma. A találmány' szerint előállított vegyületek alkalmazhatóságára vonatkozó vizsgálatot, a „talp-nyomás vizsgálat -ot végeztük patkányon. A vizsgálat célja annak megállapítása, hogy a perifériás és centrális hatású szerek milyen mértékben gátolják patkánynak gyulladt talp által létrehozott fájdalomkeltő ingerlését. A vizsgálatot 180—200 g testtömegű Sprague Dawley hím patkányokon végezzük. Az állatokat a vizsgálandó szer adagolása előtt éjszakán keresztül éheztetjük. Freund-féle komplett adjuvánst (FCA) készítünk 5 mg elölt és szárított mycobacterium butyricum (Difco) 1 ml folyékony paraffinban való szuszpendálásával. A vizsgálandó vegyületet oldhatóságától függően néhány csepp Tween 80-nal, desztillált vízben oldjuk vagy szuszpendáljuk. A vizsgálandó vegyület oldatát gyomormosással használjuk 0,5 ml/100 g testtömeg térfogatban 10 főből álló állatcsoportnál. A vizsgálathoz csoportonként 10 patkányt alkalmazunk. Lényegében Randall és munkatársai (Arch. Int. Pharmacodyn. 111, 409 /1957/) módszerét alkalmazzuk, és a talp-nyomás mérésére használt berendezés (Analgesymeter talp-nyomás mérésére, Ugo Basile from Coulbourn Instruments) Gilfoil és munkatársai által leírt berendezés (J. Pharmacol. 142, 1 /1963/) módosított változata. A készülék lényegében egy olyan eszköz, amely állandó arányban növekvő erőt fejt ki. Az 4 erőt lineáris skálán mozgó mutató segítségével figyeljük és grammokban mérjük. A gyulladásos reakciót a patkány bal hátsó talpába intradermálisan beinjektált 0,1 ml Freund-féle adjuvánssal váltjuk ki. A vizsgálandó vegyületet vagy a hordozóanyagot az adjuváns beadása után 24 órával adjuk be. A vegyületek adagolását megelőzően a patkányokat talpérzékenység alapján szelektáljuk. Azokat a patkányokat, amelyeknek fájdalomküszöbe a gyulladt talpra ható 10 g erő fölötti, nem vonjuk be a vizsgálatba. A többi állat fájdalomküszöbét 1 óra és 3 óra múlva vizsgáljuk. A vizsgálatot a gyulladt talpú kezelt csoporton és a normál talpú kontroll csoporton is elvégezzük. Minél magasabb az 1 és a 3 óra múltán leolvasott érték, annál nagyobb hatással bír a vizsgált szer a fájdalomküszöbre. A vizsgált vegyületet akkor tekintjük hatásosnak, ha az alkalmazásával elért fájdalomküszöb legalább 1,5- szerese a kontroll csoport átlagos fájdalomküszöbének. Minden csoportban megállapítjuk az analgetíkus hatást mutató állatok számát. Litchfield és munkatársai (J. Pharmacol. Exp. Ther., 96, 99 /1949/) módszerével, legalább 3 dózis alkalmazásával megállapítjuk az ED50 értéket, azaz azt a dózist, amelyben a vizsgált vegyület legalább az állatok 50%ánál analgetikus hatású. Eredményeinket a következőkben ismertetjük. Adjuváns ödéma gátlása Vegyület Dózis (mg/kg p.o.) % gátlás Az 1. példa szerinti vegyület 10 31 25 44 50 38 A 2. példa szerinti A izomer 25 6 A 2. példa szerinti B izomer 25 38 A 3. példa szerinti vegyület 10 50 Fenil-kinonnal kiváltott vonaglás egérben Vegyület Dózis (mg/kg p.o.) % gátlás Az 1. példa szerinti vegyület 10,6 31 25 60-80 200 94 A 2. példa szerinti A izomer 25 15 A 2. példa szerinti B izomer 25 55 A 3. példa szerinti vegyület 4-propiI-1,8-dietiI-2,3,4,9-20 50-tetrahidro-1 H-karbazol-ecetsav A 4 057 559 számú amerikai egyesült államokbeli szabadal-25 15 mi leírás szerinti vegyület 200 56 Patkány talp-nyomás teszt Vegyület ed50 (mg/kg. p. o.) Az 1. példa szerinti 0,02 A 3. példa szerinti 0,01 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
