195250. lajstromszámú szabadalom • Eljárás triciklusos makrolidok előállítására
195250 ezzel az oldószereleggyel eluálunk. A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, és etil-acetáttal extraháljuk. Az extraktumot csökkentett nyomáson bepárolva, 190 mg sárgás fehér porhoz jutunk. A sárgás fehér port ismét kromatografáljuk fordított fázisú „YMC“ szilikagélen, 80 mg fehér port kapva. Ezt kevés dietil-éterben oldjuk, egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk és így 56 mg kristályos anyagot nyerünk. Dietil-éterben történő -étkristályosítás után 34 mg FR-900523 anyagot kapunk színtelen tűk alakjában. 5. példa 1 g, az 1. példában kapott nyers FR-900506 anyagot (fehér por) 5 ml acetonitrilben oldjuk, és nagynyomású folyadékkromatografálásnak (HPLC) vetjük alá, shimazu LC4A-t (Shimazu Seisaku-sho) használva. YMC-S343 (CDS) (Shimakyu Co., Ltd.) gyantával acéloszlopot (25 mm belső átmérő, 250 mm hosszúság) alkalmazunk 12 ml/perc átfolyási sebességgel. A mozgófázis: 28% acetonitril, 10% n-butanol, 0,075% foszforsav, 3,75 mM nátrium-dodecil-szulfát (SDS) vizes elegye. A detektálást Hitachi UV-detektorral végezzük 210 nm-en. Egy alkalommal 100 pl mintát injektálunk, és a kromatografálást ötvenszer megismételjük, azaz az egész anyagunkat rávisszük az oszlopra. A 85-90 perc retenciós idejű eluátumokat összegyűjtjük, és azonos térfogatú (3,6 liter) etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos fázist elválasztjuk. 2 liter 1 %-os nátrium-hidrogén-karbonát vizes oldattal mossuk, és csökkentett nyomáson kis térfogatra pároljuk. A betöményített oldatból kikristályosodó SDS-t szűréssel eltávolítjuk. A bepárlás után kapott port 100 mg/ml koncentrációban acetonitrilben oldjuk, és újabb HPLC tisztításnak vetjük alá. A mozgó fázis: 12,5% acetonitril, 9,75% n-butanol, 0,075% foszforsav, 3,75 mM SDS vizes elegye. Az átfolyási sebesség 10 ml/perc. A 131 —143 perc retenciós idejű frakciókat egyesítjük, és azonos térfogatú etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist elválasztjuk, 1 %-os nátrium-hidrogén-karbonát vizes oldattal mossuk és csökkentett nyomáson kis térfogatra pároljuk. A kikristályosodott SDS-t szűréssel eltávolítjuk. A bepárlási maradékként kapott nyers port kis térfogatú etil-acetátban oldjuk, 10 ml szilikagélbői (Kiesel gél, 230—400 mesh, Merck. Co., Ltd.) készült oszlopra visszük. Az oszlopot 30 ml n-hexán/etil-acetát, 1:1 eleggyel és 60 ml n-hexán/etil-acetát, 1:2 arányú eleggyel mossuk. Az elűciót etil-acetáttal végezzük, 3 ml-es frakciókat gyűjtve. A 18—24. frakciókat egyesítjük, csökkentett nyomáson szárazra párolva, 24 mg FR-900520 vegyülethez jutunk. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás (I) általános képletű vegyületek előállítására — ahol a képletben 37 20 R3 jelentése metil-, etil- vagy allilcsoport; n jelentése 1 vagy 2, azzal a feltétellel, hogy R3 jelentése allilcsoport, ha n értéke 1, azzal jellemezve, hogy a) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, ahol R3 allilcsoport és n értéke 2 (FR-900506), ahol R3 etilcsoport és n értéke 2 (FR-900520), és/vagy ahol R3 allilcsoport és n értéke 1 (FR-900525), a Streptomyces tsukubaensis FERM-BP-927 törzset, ennek az FR-900506, FR-900520 és/vagy FR-900525 anyagokat termelő valamely mutánsát vagy variánsát táptalajon tenyésztjük, és a termékeket a tenyészléből ismert módon kinyerjük; vagy b) olyan (1) általános képletű vegyületek előállítására, ahol R3 etilcsoport és n értéke 2 (FR-900520), és/vagy ahol R3 metilcsoport és n értéke 2 (FR-900523), a Streptomyces hygroscopicus, subsp. yakushimaensis FERM-BP-928 törzset, ennek FR-900520 és/vagy FR-900523 anyagokat termelő valamely mutánsát vagy variánsát táptalajon tenyésztjük, és a termékeket a tenyészléből ismert módon kirfyerjük. (Elsőbbsége: 1985.12.02.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás (I) általános képletű vegyületek előállítására — ahol a képletben R3 jelentése metil-, vagy allilcsoport; n jelentése 1 vagy 2, azzal a feltétellel, hogy R3 jelentése allilcsoport, ha n értéke 1, azzal jellemezve, hogy a) olyan (1) általános képletű vegyületek előállítására, ahol R3 allilcsoport és n értéke 2 (FR-900506), és/vagy ahol R3 allilcsoport és n értéke 1 (FR-900525), a Streptomyces tsukubaensis FERM-BP-927 törzset, ennek az FR-900506 és/vagy FR- 900525 anyagokat termelő valamely mutánsát vagy variánsát táptalajon tenyésztjük, és a termékeket a tenyészléből ismert módon kinyerjük; vagy b) olyan (I) általános képletű vegyület előállítására, ahol R3 metilcsoport, n értéke 2 (FR-900523), a Streptomyces hygroscopicus, subsp. yakushimaensis FERM-BP-928 törzset, ennek FR-900523 anyagot termelő valamely mutánsát vagy variánsát táptalajon tenyésztjük, és a terméket a tenyészléből ismert módon kinyerjük. (Elsőbbsége: 1985.12.02.) 3. A 2. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyület előállítására, ahol R3 allilcsoport és n értéke 2 (FR-900506), azzal jellemezve, hogy a Streptomyces tsukubaensis FERM BP-927 törzset, ennek FR-900506 anyagot termelő mutánsát vagy variánsát táptalajon tenyésztjük, és a terméket tenyészléből ismert módon kinyerjük. (Elsőbbsége: 1984.12.03.) 38 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
