195245. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és berendezés sejthalmazból meghatározott biológiai sejtek kiválasztására, a kiválasztott sejtek legalább egy tulajdonságának megfigyelésére
23 195245 Az itt látható berendezésben 70 támasztóeszköz felületén felülről nyitott 71 és 72 csatornák vannak kialakítva, amelyek egymásra merőlegesen helyezkednek el. A 70 támasztóeszköz belsejében ugyancsak egymásra merőlegesen 73 és 74 vezetékek vannak kialakítva. A csatornák kapcsolódási pontjaiban az 1 sejthordozók 75 forgatható tartóban vannak elhelyezve, amelynek keresztmetszetét a 15B. ábra mutatja. A 75 forgatható tartó alsó részében 76 kapcsolóelem van kialakítva, amely 77 mozgatóelemmel kapcsolódik. A 76 kapcsolóelem és a 77 mozgatóelem például fogazással van kialakítva, és az utóbbi a 71 támasztóeszköz teljes hossza mentén mozgathatóan van megvezetve. Egyetlen 77 mozgatóelem mozgatja az összes 75 forgatható tartót, amelyek a megfelelő 71, 72 csatornákkal vannak kapcsolatban. A 77 mozgatóelem lineáris mozgásával a 75 forgatható tartók tengely körüli mozgást végeznek. Durva elválasztáshoz, vagyis a lymphocitáknak az egyéb vérsejtektől való elválasztása céljából a mintát arra a síkra merőlegesen kell beadagolni, amelyben a későbbiekben az 1 sejthordozókat mikroszkóppal vizsgálni kívánjuk. A lymphocitákat tartalmazó és az egyes 75 forgatható tartókban elhelyezett 1 sejthordozókat a többi vérsejtektől való elválasztás után a letapogatási művelethez 90°-kal el kell fordítani. Az „áteresztett fény“ technikáját alkalmazó vizsgálati eljárásokat (vagyis azokat a méréseket, amelyekben a 2 nyílás alsó végét elhagyó fényt érzékeljük) a leírt kiviteli alakban az teszi lehetővé, hogy a 71, 72 csatornáknak az a része, amelyben a 75 forgatható tartók helyezkednek el, az 1 sejthordozók alatt hosszúságuk mentén osztott 78 üvegcsővel vannak ellátva. Ez a cső úgy helyezkedik el, hogy nyitott oldala az 1 sejthordozók felé irányul (15B. ábra). Ennek megfelelően a vízszintes irányú folyadékáramlás a 75 forgatható tartóban lehetővé válik, míg a fény egyidejűleg függőleges irányban tud áthaladni. Ebben a rendszerben a belső 73 és 74 vezetékek zártak és kis keresztmetszetűek, míga felülről nyitott 72, 71 csatornák nagyobb keresztmetszetűek és nyitottak. Ugyanezt a hatást lehet más megoldások révén elérni, például az átfolyás sebességét a belső 73, 74 vezetékekben a 71, 72 csatornákhoz képest nagyobbra választva. Az eljárás a következő módon foglalható össze: 0° és 90° közötti méréstartományú szögellenörző eszköz segítségével a 75 forgatható tartók helyzetét megnatározzuk. A „durva“ elválasztás befejezése után az első lépésben a 71 csatornát és a belső 73 ■* vezetéket használjuk ki. Miután ezt a lépést végrehajtottuk, a 75 forgatható tartót 90°-kal elforgatjuk'. Ekkor a 71 csatorna és a 73 vezeték záródik, míg a 72 csatorna és az ugyancsak belső 74 vezeték nyílik. Ebben a kiviteli alakban a letapogatást végző eszközökhöz, tehát például mikroszkóphoz vércseppentö fej illeszthető. A vezérlést biztosító egységből kiadott parancsjel hatására, amit például számítógép is kiadhat, az elválasztás és az optikai letapogatás automatikusan elvégezhető, nincs szükség szakképzett személyzetre. A kezelő egyetlen feladata a 10. ábra szerinti 62 elosztókhoz a megfelelő vérvételi fecskendők illesztése, majd a tesztvizsgálatok elvégzése után a 75 forgatható tartók kicserélése. A 16. ábra szerinti kiviteli alakban egy nagyobb sejtelválasztó, letapogató és elemző (diagnosztikai) rendszer látható. A fentiekben leírtakhoz hasonló 81 átfolyáskamra 82 táblán van elrendezve, amely X, Y és Z tengelyek mentén 83, 84 és 85 léptető motorokkal eltolható. Az eltolást előnyösen számítógéppel vezérlik. A berendezés 86 mikroszkóphoz illeszkedő optikai rendszert tartalmaz, amelyben a 4. ábrához hasonló felépítésű 87 optikai elemző illeszkedik. A stimulálást 88 fényforrás, például cirkóniumlámpa biztosítja, amely azonos optikai rendszert alkalmaz. A berendezésben 89 tartály fogadja be mindazokat az oldatokat, amelyek-e szükség van a sejtek elválasztásához és tesztvizsgálataihoz, továbbá 90 vezérlőegység biztosítja, hogy mindig a megfelelő oldat kerüljön a vizsgált sejtekhez. A sejtekben a fluoreszcein koncentrációját állandó értéken kell tartani, hogy az abszolút polarizációs értékek ne változzanak, és ezért megfelelő elektrooptikai eszközökkel biztosított mechanikai visszacsatolást alkalmazunk, aminek lényege, hogy a fluoreszcens fényemisszió intenzitását időszakosan mérjük és referenciaértékkel összehasonlítjuk. Ha a mért értékek a referenciaértéktől eltérést mutatnak, akkor a PBS-oldatban a fluoreszcein-diacetát koncentrációját megváltoztatjuk. A mért értékek elemzését jól ismert számítógépes rendszerrel végezhetjük, amelyre 91 illesztőn át csatlakozunk. Ez utóbbi feladata a mért értékeknek a számítógép által megkívánt, tehát általában digitális formába való átalakítása. A számításokhoz 92 számítógépet alkalmazunk, amely célszerűen alkalmas 93 tárolóban rögzített programnak megfelelően számításokat és azonosításokat végezni. A 92 számítógép kimenetén 94 vezérlőegység van, amely a 83, 84, 85 léptető motorok részére, valamint a 89 tartályból a kívánt oldatok továbbítására vezérlő jeleket generál. A fentiekben leírt rendszer működése a következőképpen foglalható össze: „durva“ elválasztási folyamat után a 81 átfolyáskamrát a 82 táblát rögzítjük. A 86 mikroszkópot beállítjuk. Ezt követően a tesztvizsgálatok automatikusan folynak. A PBS és FDA oldatot megfelelő csatornákon és vezetékeken keresztül juttatjuk be. Az oldat egy része áthatol a felső csatornából az alsó 24 13 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
