195101. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és eszköz allergiás túlérzékenységi próbához
195101 Methocel A4M (metil-cellulóz), metilezési foka 27-31% (glukóz egység (Dow Chemical Co., Midland, Michigan, Amerikai Egyesült Államok). Fehér vazelin (Hermal-Chemie, Reinbek b. Hamburg, Német Szövetségi Köztársaság). Műanyagfóliák és műanyaggal fedett papírok (filmhordozók): „Reynolds plastic-coated freezer paper“ (Reynolds Metal Co., Richmond, Virginia, Amerikai Egyesült Államok). Poliészter 0,03 mm (MylarR). „SaranR brilliant 35 CIS (10 SARAN) 15 PE“ és „dull 45 Paper (15 PE“) Dow Chemical CO., Midland, Michigan, Amerikai Egyesült Államok). Nikkellel szemben túlérzékeny, hat önkéntes vállalkozó. A tesztanyag elkészítése Methocel gélt (3%, tömeg per térfogat) készítettünk forróvizes módszer segítségével) a Methocel15 -t forrásban levő vízben kevertük el; a keverék lehűléskor gélt képez). Kristályos vagy vízben oldott fémsókat kevertünk be a gélbe. 2,4% (tömeg per térfogat) MetchocelR végkoncentrációig vizet adtunk hozzá. Ezután a géleket mágneses keverövel a sók homogén diszpergálódásáig és feloldásáig kevertük. A géleket felhasználás előtt centrifugáltuk a levegő buborékok kiűzése céljából. E géleket a következő fémsó-koncentrációkkal állítottuk elő: Hfgítási fokozatok (mól per liter) 0,8; 0,4; 0,2; 0,1; 0,05; 0,025; 0,013; 0,0063; 0,0031; 0,0016; 0,00078; 0,00039; 0,00020; 0,00010 és 0,000049. NiCl2: 0,8-0,000049 NiS04: 0,2-0,00049 CoCl2: 0,2-0,0031 K2Cr207: 0,1-0,0031 Nátrium-dodecil-szulfát (tömeg%) 4,0; 2,0; 1,0 és 0,5. A géleket ezután egyenletes vastagságú (körülbelül 0,1 mm) rétegben szétterjesztettük az etanollal megtisztított filmhordozókon. A gélréteget szobahőmérsékleten száradni hagytuk (filmvastagság körülbelül 0,01 mm), majd éles késsel négyszögletes tapaszokra vágtuk fel. összehasonlítás céljából a nikkel-szulfátból hfgítási sort készítettünk oly módon, hogy standard tapaszpróba anyagot vazelinnel kevertünk el 12 hfgítási fokozatban (5%, 2,5% 1,3%...stb.; 0,0025% volt a 12. fokozat). Nikkel elemzés A fent leírt különböző filmhordozókon 0,1M NiS04 gél filmjeit hordozó tapaszokat (1,0 x 1,0 cm) 10-es sorozatokban elemeztük. 8 ml ionmentesített vízbe helyeztük őket, 1 percig ultrahanggal kezeltük és 12 ml indikátoroldatot adtunk hozzájuk: azonos rész ionmentes vízzel készült l,0n nátrium-hidr-9 oxid-oldatot és 1%-os etanolos dimetil-giioxim-oldatot. A minták extinkcióját 4 óra múlva spektrofotométerben, 470 nm-nél olvastuk le. Tapaszpróba kivitelezése Vazelin/NiS04 teszt-anyagot és a fent leírt tapaszokat a kísérleti személtek hátának felső részére helyeztük Scanpor szallagon levő Finn Chamber’1 szallagon levő Finn Chambers!1 illetve egyedül Scanpor'1' szallag segítségével és így azok a háton 48 órán át rögzítve maradtak. Az értékelést 48 és 72 óra múlva végeztük el. Eredmények Nikkel elemzés 0,!M NiS04 gélt tartalmazó, 1,0 x 1,0 cm méretű,négy különböző teszt-papírban, valamint, vazelinben 5% NiS04-ot tartalmazó 9-16 mg mintában a nikkel mennyisége: n pmól Ni mg NiS04 Polyester Mylar 0,68 ± 0,06 0,180 ± 0,017 Műanyaggal fedett papír 0,66 ± 0,06 0,180 ± 0,017 Saran* matt 0,73 ± 0,08 0,192 ± 0,021 Saran* fényes 0,71 ± 0,02 0,186 ± 0,006 5% NiS04 vazelinban 2,50 ± 0,61 0,660 ± 0,160 A nikkel elemzés adatai azt mutatják, hogy a találmány szerinti teszt-anyagokkal nagyobb adagolási pontosság érhető el, mint a korábbi technikákkal. A mikroszkópos vizsgálattal kimutatható kristályok mind kisebbek mintegy 90 pm-nél a film síkjában és 10 pm-nél a fils síkjára merőleges síkban. Tapaszpróbák A nikkellel szemben túlérzékeny 6 személyen (egyikük kobalttal szemben is túlérzékeny) tapaszpróbát végzünk vazelinben levő nikkel-szulfát hfgítási sorával és nikkel-szulfátot, nikkel-kloridot, kobalt-kloridot, kálium-bikromátot és nátrium-lauril-szulfátot tartalmazó találmány szerinti tapaszokkal. A találmány szerinti tapaszok mérete 1 cm2. Három további személyt tesztelünk poliészter és Saran tapaszokon (mindkettő 1 cm2) levő nikkel-szulfáttal. Két személyt műanyaggal borított ppapír-tapaszokon (0,7 x 0,7 cm; 0,5 cnr) levő nikkel-szulfáttal tesztelünk. A találmány szerint teszt-módszer nagyobb és egyenletesebb elosztású teszt-reakciót eredményezett, mint Finn Chambers -t alkalmazó próba; ez legjobban olyan esetekben mutatkozzott meg, amikor a tapaszok az allergént a legnagyobb hígításban tartalmazták. A tesztreakció intenzitása vazelinben levő 5% nikkel-szulfáttal általában megfelelt a 0,05M NiS04 gélt (0,3 pmól Ni per cm2) tartalmazó tapaszokat. A 0,7 x 0,7 cm méretű tapaszok ugyanolyan erősségű reakciót okoztak ugyanazon hfgítási végponttal, mint az 1,0 x 1,0 ernes tapaszok, de nehezebben voltak értékelhetők. A reakciók a poliészter és Saran15 10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
