194940. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás új tumorellenes hatású piridil-kinolin származék és eljárás az e vegyületet tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
194940 10 (3) MG883—12F2 vegyület kinyerése A (2) lépésben kapott tenyészetet lécentrifugáljuk és a felülúszó 5 literét 1 n sósavoldattal pH 3,5- re állítjuk. A felülúszót 660 ml etil-acetáttal extraháljuk, vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban szárazra pároljuk. 560 mg port kapunk, amelyet 1,5 ml metanolban oldunk, 1,5 g szilika géllel (Kiesel gél1160, Merck, 70— 230 mesh) összekeverjük, és vákuumexszikkátorban szárítjuk. A száraz elegyet 10 g szilikagélt tartalmazó, kloroformmal töltött oszlopra visszük. Az eluálást kloroform és metanol 100:3 arányú elegyével végezzük, majd az eluátumot 200 ml-es Sephadex LH 20 töltetű oszlopon kromatografáljuk, az eluálást metanollal végezzük. A frakciókat nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással (Nucleosil* 5c 18, Macherey-Nagel, 4,5 mm átmérő X 250 mm) tisztítjuk, az eluálást acetonitril és 1% citromsavat és 5% kálium-acetátot tartalmazó oldat (pH 6,0) 60:60 arányú elegyével végezzük. Az egyesített frakciókat koncentráljuk és mégegyszer kromatografáljuk nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással (Nucleosil 5cl8, 20 mm átmérő X 300 mm), a fentivel azonos összetételű eluenssel eluálunk. Az eluátumot másik analitikai nagynyomású folyadékkromatográfiás oszlopra visszük (Nukleosil 5cl8, 4,5 mm átmérő X 250 mm) és az MG883— 12F2-1 tartalmazó frakciókat etil-acetáttal extraháljuk, pH 3,5 értéken. Az extraktumot újra Sephadex LH 20 töltetű oszlopon (1,5 mm átmérő X 20 cm) kromatografáljuk. Tiszta MG883—12F2 vegyületet kapunk, amely 5 mg-os analitikai oszlopon analizálva egyetlen csúcsot ad. Fizikai-kémiai tulajdonságok Az MG883—12F2 olvadáspontja 177— 181°C (bomlás közben), és infravörös- és NMR-spektrumai az alábbiak. IR-abszorpciós spektrum (KBr tabletta): 9 3440, 3370, 3230, 2930, 1715, 1675, 1610, 1585, 1500, 1460, 1440, 1380, 1350, 1230, 1190, 1075, 1050, 1025, 955; NMR-spektrum (C030D)6 (ppm): 5 2,35 (3H, s), 3,83 (3H, s), 3,97 (3H, s), 5,98 (2H, bs), 6,52 ( 1H, d, J=8,5 Hz), 6,65 (1H, d, J=8,4 Hz), 7,56 (lH,bs),7,85 (1H, bs), 8,41 (1H, d, J=9 Hz), 8,95 (1H, d, J=9 Hz), 10,9 (1H, br); 10 ,3C-NMR-spektrum (CDCl,,)ő (ppm): 17,3, 60,2, 60,6, 109,4, Í14,4, 125,9, 126,2, 127,7, 130,4, 133,8, 134,2, 134,7, 137,1, 137,5, 139,2, 141,0, 145,3, 147,7, 148,9, 151,4, 166,9, 185,5, 177,2, 181,0. 15 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) képletű vegyület előállí- 20 tására, azzal jellemezve, hogy a Streptomyces albus FERM BP-930 mikroorganizmustörzset vagy annak egy mutánsát vagy variánsát asszimilálható szén- és nitrogénforrást és adott esetben szervetlen só(ka)t és habzás- 25 gátlószert tartalmazó tápközegben, merített aerob tenyészetben tenyésztjük, majd a vegyületet a tenyészetből a szokásos eljárásokkal kinyerjük. 30 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tenyésztést 20 és 35°C közötti hőmérsékleten, 3—4 napon át végezzük, majd a vegyületet a tenyészetből a szokásos extrakciós és adszorpciós eljárások- 35 kai kinyerjük és kromatográfiásan tisztítjuk. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tenyészet szűrletét vagy annak extraktumát oszlopkromatografáljuk. 40 4. Eljárás gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (1) képletű vegyületet a gyógyszerkészítésben szokásosan használt hordozó- és/vagy egyéb 45 segédanyagokkal összekeverjük és gyógyszerkészítménnyé alakítjuk. 1 lap képletekkel
