194915. lajstromszámú szabadalom • Eljárás teikoplanin a2 faktor 1 komponensének teikoplanin a2 faktor 3 komponensévé való átalakítására
c) infravörös abszorpciós spektruma nujolban a következő abszorpciós maximumokat mutatja: 3700—3100, 2960—2850 (nujol), 1645, 1590, 1510, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1230, 1180, 1 í 50, 1120, 1060, 1030, 970, 890, 845, 820, 800, 720 (nujol), d) a minta elemi analízise, azt előzetesen inert atmoszférában (% Aw=12,0) 140°C körüli hőmérsékleten kiszárítva, a következő százalékos (átlag) összetételt mutatja: szén 56,26%, hidrogén 5,20%, nitrogén 6,69%, klór 3,95%, oxigén (a különbségből számítva) 27,90%, e) 23,3 perces visszatartási (retenciós ír) idővel a fordított fázist HPLC analizálva 5 nm ZorbaxR ODS kolumnán (4,6x xl50 mm), és B oldattal eluálva 0%-tól 50%ig lineáris gradienssel az A oldatban 40 perc alatt (A oldat 25 mM NaH2P04 (aceto-nitril) 9/1, tf/tf, 6,0 pH értékű 0,1 N NaOH-dal pufferolva; B oldat: 25 mM NaH2P04 aceto-nitril (3/7, tf/tf), 6,0 pH értékű 0,1 N NaOH-dal pufferolva), csepegési sebesség 2 ml/perc (nemzetközi standard: 3,5-dihidroxi-toluol ír 8,84 perc), f) 270 MHz-n DMSO-d6-ban felvett 'H NMR spektrumban a következő jelcsoportok mérhetők néhány csepp D20 hozzáadásával (konc. 25 mg/0,5 ml) (TMS, mint nemzetközi standard: 6 = 0,00 ppm: 0,7—1,5 (m); 1,8—2,0 (m), 2,7—4,5 (m) ; 4,6—5,7 (m) ; 6,2—8,0 (m), g) só formáiban savas funkcióra képes, h) só formáiban bázikus funkcióra képes, i) FAB tömeg-spektrométerrel 1877 körüli molekulatömeget határozunk meg. A következő példák a találmány jobb érthetőségét szolgálják anélkül azonban, hogy oltalmi körét korlátoznák. 1. példa Teikoplanin hidrogénezése (a teikoplanin A2 faktor 1 komponensének megfelelő csúcs eltűnése, és a teikoplanin A2 faktor 3 komponensnek megfelelő csúcs növekedése) 2 g teikoplanint (HPLC összetétel: teikoplanin A2 1 komponens = 13,1%, teikoplanin A2 3 komponens = 19,3%, egyéb teikoplanin komponensek 67,3% (250 ml víz/metanol 70:30) oldószerelegyben néhány csepp 1 N sósav hozzáadásával tisztítjuk. Ezt a keveréket katalitikusán hidrogénezzük 2 g bárium-szulfáton lévő 5 t% mennyiségű palládium katalizátor jelenlétében, szobahőmérsékleten és normál nyomáson. A reakció folyamatát az abszorbeálódott hidrogén mennyiségével, és TCL vagy HPLC eljárással ellenőrizzük. Körülbelül 2 óra után a HPLC analízis a teikoplanin A2 l komponens majdnem kvantitatív átalakulását mutatja teikoplanin A2 3 komponenssé. A katalizátort szűréssel választjuk el, metanol/víz oldószer eleggyel, majd metanolban (250 ml) mossuk. A szűrletet összegyűjtjük, és körülbelül 40°C-on vákuumban az oldószert elpárologtatjuk. A maradékot vízben (50 ml) új7 ra felszuszpendáljuk, néhány csepp ásványi savat adunk hozzá, hogy az elegy kitisztuljon, majd ezt a keveréket pH 6,0—6,5-re beállítjuk 1 N NaOH-dal. A keletkező szuszpenzióhoz hozzáadunk n-butanolt (100 ml), és körülbelül 30 percnyi keverés után a keveréket centrifugáljuk. A két fázis felületén szilárd anyag képződik, melyet kis mennyiségű metanol hozzáadásával szűréssel nyerünk ki, majd etil-éterrel mosunk, és levegővel szárítva 1,8 g teikoplanint kapunk. HPLC összetétel: a teikoplanin A2 1 komponens hiányzik, teikoplanin A2 3 komponens = 32,0%, egyéb teikoplanin komponensek 67,9%. 2. példa Tiszta teikoplanin A2 1 komponens átalakítása tiszta teikoplanin A2 3 komponenssé A teikoplanin A2 1 komponens (200 mg) víz/metanol 70:30 (25 ml) oldószerelegyben készített szuszpenziójához néhány csepp 1 N sósavat adunk, és így kitisztítjuk. Az elegy katalitikus hídrogénezését 0,2 g bárium-szulfáton lévő 10% palládiummal szobahőmérsékkten, normál nyomáson végezzük. A reakció folyamatát az abszorbeált hidrogén mennyiségével, és TLC vagy HPLC eljárással ellenöűzzük. Körülbelül 2 óra elteltével a HPLC a ralízis a teikoplanin A2 1 komponens majdnem kvantitatív átalakulását mutatja teikop'anin A2 3 komponenssé. A katalizátort szűréssel választjuk el, és átmossuk metanol/víz elegyével, majd metanollal (25 ml). A szűrletet összegyűjtjük, majd körülbelül 40°C-on vákuumban elpárologtatjuk az oldószert. A maradékot vízben (10 ml) felszuszpendálji k, hozzáadunk néhány csepp ásványi savat, majd 1 N NaOH-t a pH 6,0—6,5-re való beállítására. A szuszpenzióhoz n-butanolt (10 ml) adunk, körülbelül 30 percig szuszpendáljuk, majd a keveréket centrifugáljuk. A két fázisfelület között szilárd anyag képződik, melyet szűréssel kinyerünk, kis menynyiségű metanollal, majd etil-éterrel mossuk és levegővel szárítjuk. így a teikoplanin A2 3 komponenst kapjuk 170 mg mennyiségben (85%-os hozam). 3. példa 100 mg teikoplanin oldatát (HPLC összetétel: teikoplanin A2 1 komponens = 13,1%, teikoplanin A2 3 komponens = 19,3%, egyéb teikoplanin komponensek 67,7% (10 ml 30%-cs vizes MeOH oldatban hidrogénezünk 490340 Pa nyomáson, szobahőmérsékleten, 100 mg 5 t% Pd tartalmú BaS04 katalizátorrí 1. 6 órás keverés után 100 mg katalizátort adunk a reakcióelegyhez és további 2 órán át keverjük. A reakcióelegyet szűrjük, és az 1. példában leírt módon dolgozzuk fel, így 90 mg teikoplanint kapunk (HPLC összetétel: teikoplanin A2 1 komponens = 1,8%, teikoplanin Aj 3 komponens = 31,6%, egyéb teikoplanin komponensek 66,5%). SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás a teikoplanin A2 1 komponens átalakítására teikoplanin A2 3 komponenssé, 8 5 194915 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
